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[凋亡检测] 染色之后不洗有什么影响

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发表于 2023-4-24 20:33:33 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
凋亡试剂盒说明书上说染色15分钟后直接上机,但平时染色完都会离心洗涤一下,不洗有什么影响

组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2023-4-25 08:40:43 | 显示全部楼层
没什么影响,这个是碧云天C1062S的说明书的一部分,用于流式检测,可以直接上机。不过在实际操作中,这个试剂盒的染色体系210 μL的体积,相对于流式检测所需要的5*10^5个细胞量来说有些太小,对于一次检测需要40-50 μL的上样体积来说也太小。所以我们一般会再加400-500 μL PBS对细胞悬液进行稀释,以便对同一个样品多次检测,得到更准确的结果。其实这个稀释的过程就算是一个不彻底的清洗了。
图片1.jpg
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 楼主| 发表于 2023-4-25 13:23:39 | 显示全部楼层
wxd 发表于 2023-4-25 08:40
没什么影响,这个是碧云天C1062S的说明书的一部分,用于流式检测,可以直接上机。不过在实际操作中,这个试 ...

平时的那些染料不洗直接上机怎样
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发表于 2023-4-25 14:16:05 | 显示全部楼层
使用PI等染料和DNA的结合并不牢固,如果洗涤的话部分染料会被洗脱下来,导致阳性细胞比例下降或者荧光强度降低,所以染色后不能进行洗涤;但是染色后应该在1 h内上样检测,因为PI有一定毒性,染色时间太长容易导致细胞死亡,PI就可以进入细胞,导致分析时死亡细胞比例升高。所以一般应该在仪器准备好后,再进行PI染色,然后不洗涤尽快上机检测。

但是在使用荧光抗体标记细胞时,必须进行洗涤,染色时间过长会导致抗体非特异性结合增加,出现假阳性信号。
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 楼主| 发表于 2023-5-5 13:49:06 | 显示全部楼层
hezeljgouc 发表于 2023-4-25 14:16
使用PI等染料和DNA的结合并不牢固,如果洗涤的话部分染料会被洗脱下来,导致阳性细胞比例下降或者荧光强度 ...

凋亡不然PI,只染fitc需要洗吗
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发表于 2023-5-6 22:28:47 | 显示全部楼层
hydwl2019 发表于 2023-5-5 13:49
凋亡不然PI,只染fitc需要洗吗

凋亡实验需要染死活染料,如PI的,如果只染了Annexin V,应该是要洗,但是就不能真分析凋亡的分期了
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