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[磁珠分选] 美天旎的磁珠分选出来的细胞能直接做流式检测吗?

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发表于 2013-3-1 10:24:25 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
又有个问题了,就是用磁珠分选出来的细胞,我要是再做流式检测,抗体还能结合上去吗,比如我用磁珠分选CD4+T细胞,CD4都被磁珠占了,那我想再做流式检测分选出来的细胞是不是CD4+的,那流式抗体还能染上吗?
刚开始想这个实验,很多不明白的,多谢了!

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发表于 2013-3-1 10:59:29 | 显示全部楼层
我没做过,但看过他们的说明书,用来分选的抗体上面都有biotin结合的,你分选过后,用anti-biotin FITC或anti-biotin PE标记就可以检测CD4了。请有经验的站友来回答一下。
@olivezhou0716  
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发表于 2013-3-1 13:50:19 | 显示全部楼层
只要抗体结合的抗原表位不一样就不影响,买抗体的时候注意一下克隆号。
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发表于 2013-3-3 10:52:51 | 显示全部楼层
听他们销售说过,他们的磁珠利用空间阻力,仅1/4的CD4分子被磁珠结合,所以分选后可以用流式检测,到底是否如此我也没有证实过。
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发表于 2013-3-4 15:23:58 | 显示全部楼层
可以的,美天旎磁珠分选后不影响流式检测:
1、美天旎的微珠直径只有50nm,比细胞小很多很多,不会影响细胞的光散射特性;
    另外,磁珠上没有荧光标记,所以也不会影响流式中荧光的激发。
2、美天旎的磁珠分选中,要通过分选柱将磁场扩大1000倍,因此分选时只需很少的磁珠标记上即可将细胞留在磁场中。其实磁性标记只占用细胞表面抗原的20-30%的结合位点,不影响后面流式抗体再去结合细胞的。

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发表于 2013-3-4 17:01:14 | 显示全部楼层
补充一点,有些磁珠抗体带荧光素的,比如我原来用磁珠分选treg,那个美天旎的试剂盒里,CD25磁珠抗体是带上PE荧光素的,分选完后直接上流式可以检测到CD25,如果还想检测其他marker,比如CD4,只要把分选后的细胞选择其他荧光通道能检测到的其他荧光素标记CD4,就可以了,不会相互影响的

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发表于 2013-3-11 13:14:43 | 显示全部楼层
大家发言都非常有道理。
考虑检测的话可以根据细胞表达强弱来选择流抗:一般情况下,细胞表达较强,磁珠占据抗原表位的20-50%左右(如2000个分子中占500个)剩下的50%以上的位点还可以结合流抗,这种情况用同一个克隆号的检测抗体就能检测到我们的目标marker的表达;但对于表达水平较弱(CD133,CD25,人CD117等)的marker,磁珠占据大部分位点,同一个克隆号的抗体无法再与同一个表位结合,只能选择不同表位的流抗才能检测到。针对biotin偶联抗体的间标分选,我们也可以选择偶联荧光素的抗生物素抗体检测,如CD25-biotin也可以用biotin-PE/APC检测。对于这种弱表达的情况,建议大家选择抗体最好是PE等强荧光素偶联的。
另外一个就是,做分选前可以先跟美天旎技术支持联系,他们可以会给一些抗体选择的建议。

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发表于 2017-12-6 18:45:52 | 显示全部楼层
swjs10197 发表于 2013-3-4 15:23
可以的,美天旎磁珠分选后不影响流式检测:
1、美天旎的微珠直径只有50nm,比细胞小很多很多,不会影响细胞 ...

磁珠没有荧光这个问题我深信不疑,但是过完磁珠做流式染色,我的样本里出现了假阳性,是因为磁珠上的抗体和流式抗体间相互作用导致的吗?(磁珠抗体是大鼠源性,流式抗体是兔源)
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