请教：培养的hMSC细胞是否存在异倍体的问题

柚子嘻嘻

1、对照问题
     除了鸡红细胞、正常人淋巴细胞做对照外，是否可以用质控血经红细胞裂解，并洗涤离心去上清后的细胞做对照？是否可以用正常的hMSC细胞作为对照？

2、调节电压问题
      用对照细胞调节并确定好电压后，一般习惯把对照细胞的G0/1期的X-Mean值调到200位置，接着跑样本细胞的时候是不是就不能再调节各通道的电压了？

3、要确定hMSC是否存在异倍体，是否需要看DI值？是不是一定需要正常二倍体细胞作为对照？

4、信赖度分析需要看哪些参数才能确保实验的准确性与可靠性？

5、异倍体和非整倍体概念上有什么区别？老是分不清楚

请教各位，谢谢大家！

niwanmao

1、对照尽量选择已知倍体，且亚期峰明显的细胞，所以如果你所用的质控血G0/G1期单峰且肯定为二倍体，也是可以。但如果发表文章，可能就不合适了，因为发表文章标准还是要鸡红细胞或其它商业化的对照。

2、如果操作规程标准，是不需要调，但如果操作不标准（如细胞密度未调整至一致水平、PI加的量不同），就需要进行单独调节，使每一管都在200道。

3、是的，必须要正常二倍体做对照。

4、一般看CV值。可以在Modfit的Diagnosis按钮中看到各项诊断性指标。

5、异倍体范围最广，包括多倍体和非整倍体。多倍体是3N、4N、6N等，而非整倍体则是其中一条染色体发生改变，故不象多倍体那样与正常染色体呈整数倍数关系。

柚子嘻嘻

老师，谢谢您的回复！
我始终还是有个基础问题没有弄明白，如果我把每一管细胞的G0/G1期调到200道，那么我在计算DI值的时候，每个标本的G0/G2期细胞峰的平均荧光均道数都为200，那么我如何去确定这个DI值。如果我的细胞是非整倍体细胞，那么我人为调节电压到200道后，是不是已经就改变了原始的数值？

niwanmao

柚子嘻嘻 发表于 2013-07-25 23:42:22

                               
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老师，谢谢您的回复！
我始终还是有个基础问题没有弄明白，如果我把每一管细胞的G0/G1期调到200道，那么我

准确的说，是把已知二倍体的g0/g1期调在200。所以操作时细胞密度、加入的pi量都尽量一致。

柚子嘻嘻

谢谢老师，我明白了。

lotozhan

用7-aad做周期倍体实验可以吗

niwanmao

lotozhan 发表于 2013-9-3 07:23

                               
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用7-aad做周期倍体实验可以吗

当然可以。其实除了PI还有好多种核酸染料都可以用。

注：Triton X-100 (终浓度0.25% 体积比)破膜5分钟。
核酸染料DAPI (1ug/ml) 或者 Hoechst 33342 (10 ug/ml) 或者 PI (50 ug/ml) 或者 7-AAD (25 ug/ml)

didi_zhou

lotozhan 发表于 2013-9-3 07:23

                               
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用7-aad做周期倍体实验可以吗

7-AAD效果不会很好，CV会很大，一般只用来鉴别死活。