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[磁珠分选] PBMC 中分选CD4T和CD14,最好能分CD8

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发表于 2018-9-10 17:12:31 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
各位老师,请教一下,我想从PBMC 中分CD4T细胞和单核细胞,那我是CD4阳选单核阴选好,还是单核阳选CD4阴选好?好像单核也有一些会表达CD4,CD4阳选的话,会不会导致损失一部分的单核细胞,这部分损失在可接受范围内吗?


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发表于 2018-9-10 18:37:09 | 显示全部楼层
样本有多少,是正常人的血吗?下游实验对各群细胞需要多少呢?因为样本很少所以一定要做依次分选吗?
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发表于 2018-9-10 21:05:19 | 显示全部楼层
可以用流式嘛
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 楼主| 发表于 2018-9-11 13:47:09 | 显示全部楼层

不好意思,我们这边没有能sort的流式仪
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 楼主| 发表于 2018-9-11 13:49:37 | 显示全部楼层
liuruiluna 发表于 2018-9-10 18:37
样本有多少,是正常人的血吗?下游实验对各群细胞需要多少呢?因为样本很少所以一定要做依次分选吗? ...

我们是购买的PBMC,然后CD14+在15%左右,CD4+在24%左右,CD8+在20%左右,要用三种细胞做不同的实验,如果能仪器分离出来的话就比较节省一些吧
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发表于 2018-9-11 17:37:25 | 显示全部楼层
qscdawx 发表于 2018-9-11 13:47
不好意思,我们这边没有能sort的流式仪

现在外面提供分选服务的学校或公司很多呀。
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 楼主| 发表于 2018-9-11 17:45:16 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2018-9-11 17:37
现在外面提供分选服务的学校或公司很多呀。

最纠结的就是附近都没有能sort的流式。如果需要用sort的需要做公交2个多小时去别的地方。倪老师,问下用磁珠应该也没啥问题吧
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发表于 2018-9-11 19:29:25 | 显示全部楼层
qscdawx 发表于 2018-9-11 17:45
最纠结的就是附近都没有能sort的流式。如果需要用sort的需要做公交2个多小时去别的地方。倪老师,问下用 ...

如果你真要用磁珠分PBMC中的CD4+T,为什么不用CD3阳选之后,再用CD4阳选呢?
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发表于 2018-9-11 22:32:59 来自手机 | 显示全部楼层
依次分选可以先从含量少的分选起,一步一步正选,最后一种细胞用负选。不过你这样一个一个选下去,时间也要很久,两个小时也打不住,最好是看看起始样本,按照你所需的细胞数把样本分为几份,分别去选,这样时间也短,细胞活性更好。
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发表于 2018-9-11 22:38:01 来自手机 | 显示全部楼层
你只分两种细胞,如果样本真的比较少需要做依次分选的话,那差不多应该是先正选CD14  ,剩下的细胞离心,重悬,然后负选CD4
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