JC-1检测线粒体膜电位

shuang2014114

请问：1，用JC-1检测昆虫细胞线粒体膜电位时，不知道怎么圈门？看到有帖子说是用阴性对照和阳性对照设门，但我的细胞阴性和阳性的分界不明显。2，同时，设门之后，会出现有的FL-1通道荧光增强，有的FL-3通道荧光减弱（我用的是Beckman Moflo,红光在FL3通道检测），这样怎么计算红绿荧光的比值啊？图片格式是emf和bmp的，上传不了，哪位大神可以指点一下？？？

niwanmao

EMF和BMP建议用看图软件转换为JPG格式上传。

具体的最好是直接圈出凋亡细胞，而不是计算比值，计算比值更多见于以前的免疫荧光时代，现在流式中虽然还是有人在用，但我个人觉得不太好，详细参见：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5352-1-1.html

shuang2014114

niwanmao 发表于 2016-8-28 21:29
EMF和BMP建议用看图软件转换为JPG格式上传。

具体的最好是直接圈出凋亡细胞，而不是计算比值，计算比值更 ...

非常感谢老师的指点，如果不计算比值，线粒体膜电位的下降就只能从图上大概的表示一下？还有，用画十字象限吗？我上传了几张做的流式图，感觉处理和对照差别不大，不知道是什么原因，希望老师能帮忙再指点一下。我从网上查到有人说在调好补偿的情况下，不用画十字象限，不能用两象限所占的百分比相来代表线粒体膜电位，应该分别找到红色和绿色荧光所对应的Geom值，再相除即可，您怎么看？？问的问题比较多哈，希望老师可以原谅我这个刚入门的。

niwanmao

shuang2014114 发表于 2016-8-30 20:38
非常感谢老师的指点，如果不计算比值，线粒体膜电位的下降就只能从图上大概的表示一下？还有，用画十字象 ...

你第一个CPT处理的那管，把十字门往上移到分界清晰处，其它两管十字门没有问题。
直接读取右下象限的数值，就是线粒体膜电位发生降低的早早期凋亡细胞比例。

我前面说了，用红、绿荧光相除，那是以前的老方法，尽管还有少量文章在用，但不太合理。

海棠依旧

niwanmao 发表于 2016-8-31 08:01
你第一个CPT处理的那管，把十字门往上移到分界清晰处，其它两管十字门没有问题。
直接读取右下象限的数值 ...

那请问老师现在应该用什么样的比值来表示线粒体膜电位

niwanmao

海棠依旧 发表于 2018-5-20 22:35
那请问老师现在应该用什么样的比值来表示线粒体膜电位

就用前面几个图的LR象限比例

海棠依旧

niwanmao 发表于 2018-5-21 09:12
就用前面几个图的LR象限比例

是用LR/UR吗？不是红绿荧光比值吗？我理解的使用UR的红光/绿光或者是所有细胞的FL2/FL1 我也不知道对不对，还想请老师详细解答下

niwanmao

海棠依旧 发表于 2018-7-6 09:33
是用LR/UR吗？不是红绿荧光比值吗？我理解的使用UR的红光/绿光或者是所有细胞的FL2/FL1 我也不知道对不对 ...

我个人不建议用比值，比值的方式虽然有文章采用，但这是非常粗的比较方法。

海棠依旧

niwanmao 发表于 2018-7-6 11:02
我个人不建议用比值，比值的方式虽然有文章采用，但这是非常粗的比较方法。 ...

那老师是建议用细胞比例？UR/LR的比值对吗

niwanmao

海棠依旧 发表于 2018-7-7 17:46
那老师是建议用细胞比例？UR/LR的比值对吗

我个人会直接用LR的比例，就是发生线粒体膜电位降低的那堆细胞比例。