关于Hoechst33258和Hoechst33342的染色问题

a2782953

最近需要做精子质量的检测，需要对精子进行染色后评估其viability，可是发现一个问题，关于Hoechst333258和Hoechst33342的。首先这两个染料根据百度及维基百科，以及碧云天公司的产品介绍中都说其是细胞膜通透性的。在我以前看到的几篇外文文献中用其来染细胞核用来标记全部细胞，如这片文章中用Hoechst33342来标记全部细胞：Protective effects of iodixanol during bovine  sperm cryopreservation，在这一篇文章中用Hoechst33258来标记死亡精子：Assessment of the effect of testosterone on the acrosome reaction of human spermatozoa，而在另外的文章中还有人说用Hoechst33258用来标记活细胞，如：温度和Hoechst 33258 浓度对人活精子标记效果的影响，这篇文章。另外根据我自己的实验结果，我发现我染小鼠精子的时候，Hoechst 33342和PI染色，Hoechst33342并没有像一些文章说的那样专门染活的精子，而是几乎全部精子全可以染。请教有经验的朋友解释下这两种染料是染活细胞的还是染死细胞的？如果其是染活细胞的，那么死细胞膜是不完整的，是不是他们也可以直接接触到细胞DNA然后也可以染上颜色呢？
    另外一个小问题：sybr-14是不是单买的话无法买到？只有在live/dead kit中才有呢？

niwanmao

没做过这几种染料，只能帮你搜索一下了。

hoechst33342应该是染活精子的：http://books.google.com.hk/books ... p;ved=0CC8Q6AEwADgK

sybr14应该可以单买的，可以看看这篇全文是否提供了厂商名称：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22763236

a2782953

谢谢倪老师的对问题的回答，还是那么给力，都给出自己搜索的链接了，我再查一下！

niwanmao

a2782953 发表于 2013-01-24 10:25:19

                               
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谢谢倪老师的对问题的回答，还是那么给力，都给出自己搜索的链接了，我再查一下！

想起来，hoechst33342用在干细胞侧群分析上，就是利用干细胞对其外排的特性。所以我觉得活细胞和死细胞都可以染。

gcz5340

我给别人做过hoechs33342染小鼠精子的分选。该同学同时染了PI去除死细胞，然后根据hoechst染倍体情况分选精子细胞。如果操作的好，其实死细胞很少的。

niwanmao

gcz5340 发表于 2013-1-24 21:46

                               
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我给别人做过hoechs33342染小鼠精子的分选。该同学同时染了PI去除死细胞，然后根据hoechst染倍体情况分选精 ...

Hoechst33342死的精子会不会染上？

gcz5340

特别找了个PI阳性比较多的，应该说死的还是可以染上的。

椴树

gcz5340 发表于 2013-1-27 13:28
特别找了个PI阳性比较多的，应该说死的还是可以染上的。

请问 Hoechst的图为什么不是像PI测细胞周期那样的2个峰中间连一个平台的分布？

zmeraner

是不是精子细胞都是单倍体啊，所以就一个主峰。其他体细胞有双倍体，有4倍体，还有中间的平台（2-4倍体之间的分裂状态）。

niwanmao

椴树 发表于 2014-9-16 22:25
请问 Hoechst的图为什么不是像PI测细胞周期那样的2个峰中间连一个平台的分布？ ...

两个峰中间是否有平台，跟细胞的S期比例多少有关，应该跟方法无关：）