关于流式测中性粒细胞CXCR4

可爱朱古力tutu

大家好，我想用流式测定人血中性粒细胞表面CXCR4的表达情况，不知道中性粒细胞表面标记选用哪些呢？？？有咨询过老师，她说用CD45和CD11b，但是CD11b不止分布在粒细胞，单核细胞也有分布，而且我是先用物理分离法先提中性粒细胞，用CD45是否是必须的？我在想可不可以不用CD45，而用CD11b和CD15，这样的话加上同型对照，就得买6种抗体咯，求各位大神指导，有没有最佳标记的方法啊，万分感激！！！！

niwanmao

在临床上，其实用CD45/SSC散点图就能把粒细胞圈出来。

可爱朱古力tutu

niwanmao 发表于 2015-4-12 14:10
在临床上，其实用CD45/SSC散点图就能把粒细胞圈出来。

哦哦，具体的步骤是怎样啊？才进实验室，实在是有太多不懂地方，多多指教

可爱朱古力tutu

老师，我看到也有用FCS/SSC来鉴定中性粒细胞的，参考文献：Human neutrophils were identified by their characteristic forward/ side scatter (FCS/SSC) and/or CD16-positive staining.
Neutrophils were preincubated with human serum for 15 min and then stained with anti-CXCR4-PE (50 g/ml) or a PE-labeled isotype matched control mAb and anti-CD16-FITC (3.33 g/ml) for 20 min.
【Chemokines Acting via CXCR2 and CXCR4 Control the Release of Neutrophils from the Bone Marrow and Their Return following Senescence】
请问这个方法可靠吗？

可爱朱古力tutu

我看到有用FCS/SSC来圈中性粒细胞的，
Human neutrophils were identified by their characteristic forward/ side scatter (FCS/SSC) and/or CD16-positive staining. 【Chemokines Acting via CXCR2 and CXCR4 Control the Release of Neutrophils from the Bone Marrow and Their Return following Senescence】
不知道这种方法可靠吗？

niwanmao

可爱朱古力tutu 发表于 2015-4-12 20:58
老师，我看到也有用FCS/SSC来鉴定中性粒细胞的，参考文献：Human neutrophils were identified by their ch ...

光用FSC/SSC当然也是可以的，设门如下：



如果用CD45/SSC设门，设门如下：

可爱朱古力tutu

niwanmao 发表于 2015-4-13 08:16
光用FSC/SSC当然也是可以的，设门如下：

哪种方法更可靠呢？精确度更高呢

niwanmao

可爱朱古力tutu 发表于 2015-4-13 08:20
哪种方法更可靠呢？精确度更高呢

粒细胞分群清楚，两种方法差不多。

可爱朱古力tutu

niwanmao 发表于 2015-4-13 08:30
粒细胞分群清楚，两种方法差不多。

那还需要进一步标记中性粒细胞吗？如用CD15或者CD11b或CD16。

niwanmao

可爱朱古力tutu 发表于 2015-4-13 08:44
那还需要进一步标记中性粒细胞吗？如用CD15或者CD11b或CD16。

中性粒细胞已经圈出来了，而且分群这么清楚，为什么还需要这些标记？