求教：腹腔巨噬细胞M1M2分型圈门

nkdb

各位大神老师，小弟第一次做流式巨噬细胞分型检测，标本是用的大鼠腹腔巨噬细胞，如下分型是根据阴性对照所做，请问这样圈门对吗

niwanmao

68和163貌似还行，门再稍微往右一点即可。
TNF-alpha没分开，是不是破膜没破好还是本身表达低？

STRIVING

niwanmao 发表于 2018-1-25 20:48
68和163貌似还行，门再稍微往右一点即可。
TNF-alpha没分开，是不是破膜没破好还是本身表达低？ ...

老师，请问破膜固定是不是都是一起的呢？我需要做流式分选，细胞不能固定，但抗体说明书要求胞内染色，这个该怎么弄呢？

niwanmao

STRIVING 发表于 2018-1-27 21:06
老师，请问破膜固定是不是都是一起的呢？我需要做流式分选，细胞不能固定，但抗体说明书要求胞内染色，这 ...

做分选的标志，需要选择表面标记，不能选择胞内、核内标记。

nkdb

niwanmao 发表于 2018-1-25 20:48
68和163貌似还行，门再稍微往右一点即可。
TNF-alpha没分开，是不是破膜没破好还是本身表达低？ ...

感谢倪老师指点，因为是用的在体实验提取的细胞直接测的，没有用蛋白转运抑制剂，所以TNF可能测的不好。

STRIVING

niwanmao 发表于 2018-1-27 22:56
做分选的标志，需要选择表面标记，不能选择胞内、核内标记。

谢谢老师，我用的是CD206，但说明书说的是细胞内染色，另外我另一抗体是CD16/32,这时封闭应该怎么选呢？

niwanmao

STRIVING 发表于 2018-1-29 10:12
谢谢老师，我用的是CD206，但说明书说的是细胞内染色，另外我另一抗体是CD16/32,这时封闭应该怎么选呢？
...

如果必须胞内，那么分选后肯定只能做其它生物学检测，不能再培养。

国外Tabasum Sidiq站友有一段关于小鼠脾脏巨噬细胞分选的回答，供参考：
Hi, Is there any good way to isolate red pulp macrophages from spleen? I tried sorting the splenic macrophages by FACS using CD11b and F4/80 markers. I used 4-color staining: FITC CD11c, gated them and sorted them separately in one tube, APC F4/80 and CD11b double positive population gated and sorted them separately in the different tube simultaneously. I used PE Gr-1 also to gate out neutrophils. However, the problem is I am getting very few F4/80/CD11b double positive cells with the purity of about only 60%. The wiered thing is that I am getting more sorted DCs with high purity compared to macrophages from the same sample. Please suggest if there is any other better way to sort the splenic macrophages in good number with high purity. I have attached the sort pictures.
https://flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=attachment&aid=MTQxOTN8NmQ1ZWY2M2N8MTcxMzQxMDg0N3wwfA%3D%3D

STRIVING

niwanmao 发表于 2018-1-30 10:13
如果必须胞内，那么分选后肯定只能做其它生物学检测，不能再培养。

国外Tabasum Sidiq站友有一段关于小 ...

谢谢老师

yxyyjs

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