PE-Cy7-CD19染色

mzzq1993

这是用PE-Cy7染的CD19，未破膜的单染管只有阴阳两群，为什么破膜后会有三群？

鑫鑫点灯灯

破膜之前培养了吗？培养、刺激会对细胞有影响，所以与只单染表染的细胞有差别吧

niwanmao

1、是否同时染了其它标记？如有，是否因补偿？
2、是否其它细胞非特异性染色的干扰？可从FSC/SSC以及其它荧光参数散点图进行判断。

mzzq1993

鑫鑫点灯灯 发表于 2018-1-28 23:35
破膜之前培养了吗？培养、刺激会对细胞有影响，所以与只单染表染的细胞有差别吧 ...

破膜之前培养了，与单染表染的有差别，单染表染管是只有一群的，但是以前做的一般是图会变得难看点，不会出现这么明显的两群

mzzq1993

niwanmao 发表于 2018-1-29 08:18
1、是否同时染了其它标记？如有，是否因补偿？
2、是否其它细胞非特异性染色的干扰？可从FSC/SSC以及其它荧 ...

1、还染了FITC-CD24,APC-CD38,以及胞内染了PE。重新用FLOWJO调了下补偿还是一样，没有太大改变
2、在染抗体前加了Fc-block的，不过不知道用散点图怎么判断，麻烦老师教下

niwanmao

mzzq1993 发表于 2018-1-29 23:34
1、还染了FITC-CD24,APC-CD38,以及胞内染了PE。重新用FLOWJO调了下补偿还是一样，没有太大改变
2、在染抗 ...

你把其它各个组合的散点图都放出来看看。

mzzq1993

niwanmao 发表于 2018-1-30 10:27
你把其它各个组合的散点图都放出来看看。

以上就是各个组合的图，倪老师，PE-Cy7分成三群会不会是抗体解偶联了

niwanmao

mzzq1993 发表于 2018-1-31 16:05
以上就是各个组合的图，倪老师，PE-Cy7分成三群会不会是抗体解偶联了

我是希望能够看到各个邻近通道的散点图组合，这些散点图都不算。

mzzq1993

niwanmao 发表于 2018-1-31 21:13
我是希望能够看到各个邻近通道的散点图组合，这些散点图都不算。

倪老师，您说的是这些吗？这就是全部通道组合的图了，不好意思哈，我不是很理解

niwanmao

mzzq1993 发表于 2018-2-3 12:09
倪老师，您说的是这些吗？这就是全部通道组合的图了，不好意思哈，我不是很理解
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综合整体看，弱表达那群是对的，高表达属于非特异信号