关于散点图形态

王风

请问大家为什么有的流式图能做出图1那种很好看的圆形抱团 ，有的就是图2那种梭形的呢？尝试过调整电压等，发现还是没啥用呀。。。请高人指点谢谢了！

niwanmao

1、跟抗原本身的表达模式有关。
2、跟非特异性结合的程度有关。
3、你这里对比的是阳性群和阴性群，没有可比性。

ghqiu09

图2的丝状的是因为坐标轴引起的，10的0次方到10的1次方，同样的距离，数值（1，2，3.。。）少很多，所以会这样。解决的办法就是加入双对数坐标轴

王风

ghqiu09 发表于 2018-10-8 09:55
图2的丝状的是因为坐标轴引起的，10的0次方到10的1次方，同样的距离，数值（1，2，3.。。）少很多，所以会 ...

谢谢解答 但是坐标更改试过了  没有啥效果。。。

王风

niwanmao 发表于 2018-10-6 11:10
1、跟抗原本身的表达模式有关。
2、跟非特异性结合的程度有关。
3、你这里对比的是阳性群和阴性群，没有可 ...

谢谢大佬！！其实我这是随便选的两张结果图，不是一个实验的，也没有比较的意思吧。有的时候空白管都有这样的情况，有的空白管就是很好看的圆球，有的就是这种自左下向右上的瓜子形状，反而是更换纵坐标荧光选项，葵花籽还能变成西瓜子也不想影响实验吧  就是单纯好奇，请问大佬的流式图是不是一般都做得形状很圆呀  像我们这种是不是电压调的不好？

王风

ghqiu09 发表于 2018-10-8 09:55
图2的丝状的是因为坐标轴引起的，10的0次方到10的1次方，同样的距离，数值（1，2，3.。。）少很多，所以会 ...

不是说丝状呀  丝状是可以换坐标改变的 是指整个细胞团的形状

王风

niwanmao 发表于 2018-10-6 11:10
1、跟抗原本身的表达模式有关。
2、跟非特异性结合的程度有关。
3、你这里对比的是阳性群和阴性群，没有可 ...

谢谢大佬！！我这是随便选了两次实验的结果图，也没有比较的意思吧。有的时候连Blank管都有这种情况出现，有的就是好看的一个原团，有的就是自左下向右上的瓜子型。更换纵坐标的荧光，倒是会有些变化  譬如从葵瓜子变成西瓜子状。所以不知道是不是因为电压调的不对导致的？大佬平时的流式图一般都是好看的原团形吗？另外就是想请问大佬，像下图这种情况是怎么回事呢？都是balnk细胞，图一是单纯的Blank，图二是加了APC二抗对照组，图三是加了APC标记的一个指标抗体，按道理都是阴性结果，为什么位置会差的这么大呢？？是因为抗体没洗干净，还在buffer里面吗？？

niwanmao

王风 发表于 2018-10-8 19:56
谢谢大佬！！其实我这是随便选的两张结果图，不是一个实验的，也没有比较的意思吧。有的时候空白管都有这 ...

对于荧光组合的散点图，与细胞自发荧光有关，例如淋巴细胞自发荧光弱，所以其阴性细胞群大多可以呈偏圆的分布，而粒细胞等自发荧光偏强的，往往会呈斜向分布。但是你上面这几张图，本身选的坐标就不对，横坐标选择FSC，这样的坐标组合，更加不能用什么形状来衡量好坏了，因为FSC反映的是细胞大小，细胞大小不同，你最后拿到的图形当然也不同。

王风

niwanmao 发表于 2018-10-9 08:14
对于荧光组合的散点图，与细胞自发荧光有关，例如淋巴细胞自发荧光弱，所以其阴性细胞群大多可以呈偏圆的 ...

谢谢！第一个问题，我明白您的意思了，就是形状还是自发荧光有关吧！但后面贴的三张图是想请教您另一个问题，就是这三张都是blank,按理说都应该是阴性结果，第一张是纯blank，第二张是blank+APC标记的羊抗人Fc二抗对照（实际是647，用的是APC通道），第三张balnk+APC标记的一个直标抗体（balnk不表达此抗体针对的靶标），为啥细胞群位置会相差这么大呢？我自己想是否是因为抗体没有洗干净还在buffer里面还是因为有非特异性结合呢，我的细胞是T细胞按理说也没有啥Fc受体呀。也有人说是647这个荧光不行，它的非特就是药品厉害些，想请教下您怎么认为，谢谢赐教！

niwanmao

王风 发表于 2018-10-9 14:54
谢谢！第一个问题，我明白您的意思了，就是形状还是自发荧光有关吧！但后面贴的三张图是想请教您另一个问 ...

当然不一样，用的东西不一样，结果当然也不同。
所有东西都不加的样本，只适合调节初步的电压，不能用于分析设门。
至于后面两个图，因为你用的二抗不同，结果当然不同，需要你根据实验需要，选择正确的二抗。

至于淋巴细胞没有Fc受体，倒也不是那么绝对：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-6255-1-1.html