观测病毒感染的可以表达EGFP蛋白的细胞占总细胞的比例

yichuanzimu

我想探究痘病毒对于某基因表达差异的细胞（通过RNAi获得）是否具有不同的侵染能力，于是用1感染复数（一个病毒平均侵染一个细胞）的病毒处理细胞，在荧光显微镜下观测到绿色荧光后收样上流式，同时以未被感染的细胞作为对照，怎样才能计算出表达EGFP的细胞占总细胞数的比例呢。未被感染的细胞在FITC通道也会有峰值出现，通过什么方法可以将背景消除

niwanmao

yichuanzimu 发表于 2019-6-6 12:36
所以按照我图上的方法，在本底后面直接选择区域来看感染率的方法是可以的对吧，谢谢老师 ...

不，GFP转染后，可以非常漂亮地分成两个峰，高的峰就是阳性。

yichuanzimu

这是导出的图片，1，2是加过病毒的，3，4是没加病毒的对照

yichuanzimu

类似的，我想计算m2区域的百分比，应该如何处理数据

niwanmao

yichuanzimu 发表于 2019-6-5 15:34
这是导出的图片，1，2是加过病毒的，3，4是没加病毒的对照

未加病毒的这个单峰，是本底啊，正常的啊。
你只要看M2的比例，就是转染率

yichuanzimu

niwanmao 发表于 2019-6-6 08:41
未加病毒的这个单峰，是本底啊，正常的啊。
你只要看M2的比例，就是转染率 ...

所以按照我图上的方法，在本底后面直接选择区域来看感染率的方法是可以的对吧，谢谢老师