问题求教

CRP

请教各位老师，我上流式的细胞理论上有1X10^6，但是最终只有四五千个检测到，检测的速度细胞数在9-16/s,有点低，请问我需要如何改进？

niwanmao

CRP 发表于 2011-9-12 10:20

                               
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请教各位老师，我上流式的细胞理论上有1X10^6，但是最终只有四五千个检测到，检测的速度细胞数在9-16/s,有 ...

理论归理论，首先，在处理过程中，每次离心洗涤或裂解，均会丢失较多的细胞；其次，跟你细胞计数的准确性也有关系。
如果最终只检测到4、5000的话，说明你丢失的比例太大，如果你确定计数没有问题，那么，我觉得你需要注意你的离心速度是否过低？离心后去上清的操作是否手法过猛？
检测时的速度跟体积有关，是否体积过大？

CRP

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谢谢您的回复
我1X1^6是密度，离心我只离一次，300g，大概1500g，不知这样是否合适？

niwanmao

CRP 发表于 2011-9-14 11:39

                               
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谢谢您的回复

你是指1500转/分吧，应该还可以的啊。
去上清你是怎么去的？用吸管还是倒掉？

CRP

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恩，我是用枪吸取的，因为只有1.5ml

niwanmao

CRP 发表于 2011-9-14 13:04

                               
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恩，我是用枪吸取的，因为只有1.5ml

这个操作不小心就很容易丢失细胞，建议你用1800转/分离心之后，倒掉上清之后，做下面这个动作：保持倒的姿势，迅速在面巾纸上碰一下，把管口的水吸干，马上把管子回到原位，这样就不容易丢失细胞了。注意，这个动作一定要迅速，1秒钟完成。

CRP

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好的，我试试，谢谢您的帮助！