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慢性淋巴细胞白血病（CLL）的临床表现异质性很高，约1/2病人不需要治疗，然而，有一部分患者预后很差，无论经过什么治疗，其平均总体存活时间仅1～2年。
CLL的预后和治疗策略与生物学预后因子、治疗方法、缓解质量和持续时间相关。CLL治疗反应评估标准在国家癌症研究院工作组（NCI-WG）指南中做了规定，治疗的目的就是取得完全缓解，就是清除大部分肿瘤细胞，从而使患者获得更好的生存。这就意味着提高治疗效果的关键点就是清除微小残留病灶（MRD）。目前广泛接受的CLL MRD阴性标准是每1万个细胞内CLL细胞少于1个。
目前已经有不少方法来检测MRD，包括PCR法和多参数流式细胞术法。在2007年Rawstron等人发布了标准化的4色流式细胞术方法检测CLL的MRD。而实时定量等位基因特异性寡核苷酸免疫球蛋白重链基因PCR（RQ-ASO IGH PCR）利用患者特异性寡核苷酸探针检测MRD，该方法非常耗费人力、财力，而且需要在治疗前先分析肿瘤细胞标本。因此，流式细胞术是很多地方首选的方法，它的检测灵敏度可达1/10E5。
本文的目的在于基于标准的4色流式细胞术，开发新的8色方案，以提高方法的简便性、灵敏性、可比性。
流式细胞术检测方案
作为对照的4色方案：
- anti-CD14/3/45/19
- anti-CD20/38/5/19
- anti-CD22/81/5/19
- anti-CD79b/43/5/19
8色方案：
- anti-CD3/5/19/22/43/45/79b/81 (Tube 1)
- anti-CD5/14/19/20/38/43/45/79b (Tube 2)
每管至少获取70万个事件，MRD阳性和阴性的区分标准定义为0.01％。
主要利用第1管计算MRD比例，第2管是用于确认第1管的结果，以保证MRD的准确性。
更详细的荧光素配制见下表：
表2：8色方案的荧光素搭配
设门方法见下图：
图1：8色方案分析设门步骤
CLL的MRD分析对于治疗评估已经越来越普遍，它亦成为异基因移植后和临床验证时终点评估的一个强有力的指标。
尽管RQ-ASO PCR的灵敏度达到1/10E6，但由于流式细胞术的快速、廉价以及与RQ-ASO PCR相媲美的结果，故成为最常用的检测方法。
Rawstron等人设计的4色方案虽然已在多中心随机研究中获得了验证，但分析MRD时比较费时，因此他们后来继续设计了6色方案，以减少试剂使用、减少标本量要求、简化分析步骤。尽管现在还有10色方案可供使用，但由于颜色要求高，目前还不具备临床应用价值。
因此，在兼顾实用性、简便性等要求下，作者设计了8色方案，该方案与4色方案完全一致，与RQ-ASO PCR一致性也非常高。
下载PDF（需1颗流星）：
Detecting minimal residual disease in patients with CLL.pdf
(301.83 KB, 下载次数: 33, 售价: 1 流星)
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发表于 2014-6-6 22:13:07
发表于 2014-6-9 16:58:51
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