有关细胞增殖的问题，请教各位老师

ghqiu09

最近在做细胞增殖，碰到一个问题，就是发现细胞在CFSE染色后FSC和SSC如下图A，分析过程中发现，左边的那团细胞实验组中的CFSE荧光值比阴性对照和阳性对照都要高，而右边那团的就比较正常。左边的细胞是不是已经死了？那我实验组的细胞基本都死光了都。。。。实验做的不好，但是应该这么分析是没错的吗？？？

ghqiu09

补充说明一下，90%都是CD4和CD8 T细胞

niwanmao

会不会是CFSE的浓度太高了？需要做个梯度看看哪个浓度最佳。

请参考站内资料：
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2370-1-1.html
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-4562-1-1.html

ghqiu09

niwanmao 发表于 2016-11-29 18:13
会不会是CFSE的浓度太高了？需要做个梯度看看哪个浓度最佳。

请参考站内资料：

十分感谢，终于够流星看帖子了。另外想请问一下，实验组中有个峰比阴性对照还高是不是那些细胞其实是增殖了的，然后又死了的（就是活化诱导的凋亡？），死了的细胞好像往往萤光值都比较高。

小憨

我认为分析圈门应该是右侧的门，左侧的门应该是发生凋亡的细胞。另外你培养的时间是多少，时间少细胞未增殖看不到多个峰，时间长全部增殖也看不到多个峰。

ghqiu09

小憨 发表于 2016-11-30 15:05
我认为分析圈门应该是右侧的门，左侧的门应该是发生凋亡的细胞。另外你培养的时间是多少，时间少细胞未增殖 ...

谢谢老师，我们从一天到五天都做过了，现在考虑一个可能是CFSE浓度的问题，还有一个是细胞来源的问题（人T细胞来源实在有限，是经过别人纯化扩增后的T细胞），打算纯化后直接做，再看看。

niwanmao

ghqiu09 发表于 2016-11-30 12:36
十分感谢，终于够流星看帖子了。另外想请问一下，实验组中有个峰比阴性对照还高是不是那些细胞其实是增殖 ...

是的，死了的话就会将各种荧光抗体都粘上，导致非特异性染色很强。