都是CD3的抗体（一个多抗，一个单抗），做出来的图不一样

Justin-威 · 发表于 2017-1-5 09:24:04

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如图，B1-1是BLANK组，B1-2是多抗CD3E，B1-3是小鼠单抗CD3，用的间接法，除一抗不一样之外，其他试验条件都一样，做出来的图形差异比较大，是什么原因呢，另外这图形不一样说明了什么问题？请大神讨论

freshrain · 发表于 2017-1-6 10:31:10

看图现在最大的差异是阳性群体的荧光强度差异，不知道阳性细胞比例差异大吗？个人觉得如果比例差异不大，那就基本可以认定抗体都是比较合格的抗体，没有造成假阳/阴性的出现，对于荧光强度高了，应该是结合的二抗的数量多了，原因应该是多抗是不同抗原表位的抗体的一个混合物，单一细胞上结合的量会比同样表位的单抗结合量高（即同一抗原结合不止一个抗体）造成的。

niwanmao · 发表于 2017-1-5 20:00:57

多抗可能由于非特异性结合明显，所以荧光特别强吧？

小憨 · 发表于 2017-1-7 11:15:40

niwanmao 发表于 2017-1-5 20:00
多抗可能由于非特异性结合明显，所以荧光特别强吧？

倪老师我想请教一下，在临床应用的流式，抗体的克隆号是自己选择的吧，没有相应规范和标准规定一定要应用某一种克隆号的抗体吧？那比如像楼主这种情况的话，采用了不同种类、品牌、批次的抗体，或者不同实验室间采购的抗体不同所造成的结果不一致，这样的话怎么保证流式诊断结果的可重复性，以及实验室间结果的可参比性呢？

niwanmao · 发表于 2017-1-7 13:14:40

小憨发表于 2017-1-7 11:15
倪老师我想请教一下，在临床应用的流式，抗体的克隆号是自己选择的吧，没有相应规范和标准规定一定要应用 ...

没错，这是目前最大的问题，所以我希望今年通过流式中文网尝试开展免疫分型室间质控。
前些年学组制定专家共识的时候我提到过写上克隆号，但是可能刘教授她们有其他考虑，没写进去，euroflow那篇文章写进去了

小憨 · 发表于 2017-1-9 19:17:08

niwanmao 发表于 2017-1-7 13:14
没错，这是目前最大的问题，所以我希望今年通过流式中文网尝试开展免疫分型室间质控。
前些年学组制定专 ...

嗯，看来还是有很多实际问题待规范，饭还得一口一口吃，也能理解~因为我刚刚接触临床这一块，还有好多东西需要向咱们网站的同行们请教，虽然以后的工作重点还是科研吧，但是临床应用我还是很有兴趣的。

niwanmao · 发表于 2017-1-9 22:00:52

小憨发表于 2017-1-9 19:17
嗯，看来还是有很多实际问题待规范，饭还得一口一口吃，也能理解~因为我刚刚接触临床这一块，还有好多东 ...

真的需要像您这样热心而又有经验的FLOWER经常上来指导一下

特勒兮兮 · 发表于 2017-1-12 08:48:40

niwanmao 发表于 2017-1-7 13:14
没错，这是目前最大的问题，所以我希望今年通过流式中文网尝试开展免疫分型室间质控。
前些年学组制定专 ...

室间质控。。。最近我们老板老拿我们流式的结果和同一个样本其他流式机的检测结果做对比，我感觉是不能对比的，我想请教一下倪老师有相关的文章吗

niwanmao · 发表于 2017-1-12 12:15:56

特勒兮兮发表于 2017-1-12 08:48
室间质控。。。最近我们老板老拿我们流式的结果和同一个样本其他流式机的检测结果做对比，我感觉是不能对 ...

我们这个是免疫分型，更看重抗原表达强度，抗原表达率次要。还是可以对比的，这样多家单位参与对比后，可发现自己平时用的哪个抗体存在问题

yezuixiaoxiang · 发表于 2017-2-14 14:45:31

你好，我想请问下，本实验中用的CD3抗体，加多少量呢？另外，荧光二抗是用的哪一种啊？比例是多少？

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