一直在做Breg，可是一直标不出IL-10，求助

JennyS

做了好久Breg，可是IL-10一直标不出来，培养时间长了，CD19也分不开了。
培养72h、48h、24h、5h都做过，不知道是哪里出了问题？

  

PMA 50ng/ml

Iono 1ug/ml

Mon 5ug/ml

LPS 10ug/ml

niwanmao

破膜剂的问题吧？

whyxa

1，改用Q-PCR方法检测一下，是不是你的两组sample在RNA水平是否由差异，2，至于你的CD19随着时间的延长是有可能减弱的，就像T cell 活化后CD3内吞一样， IL-10检测不出来，首先要确定你的IL10抗体是不是work，设置一个阳性对照， 3，如倪老师所说，Check一下 GojiStop 是不是work，破膜剂是不是work

Noddy

niwanmao 发表于 2017-3-2 19:27
破膜剂的问题吧？

倪老师您好，这个IL-10破膜剂是用普通破膜剂就可以了还是得用Foxp3的核内破膜剂呢？

niwanmao

Noddy 发表于 2017-3-8 15:16
倪老师您好，这个IL-10破膜剂是用普通破膜剂就可以了还是得用Foxp3的核内破膜剂呢？ ...

普通的就可以了。

如果有需要，可以尝试一下我们流式中文网出品的破膜剂MemMagician： https://kdt.im/PhQvsr

Noddy

niwanmao 发表于 2017-3-8 15:26
普通的就可以了。

如果有需要，可以尝试一下我们流式中文网出品的破膜剂MemMagician： https://kdt.im/P ...

这个普通破膜剂产品可不可以也用于TGFβ的破膜呢？

niwanmao

Noddy 发表于 2017-3-9 09:04
这个普通破膜剂产品可不可以也用于TGFβ的破膜呢？

是的。

JennyS

niwanmao 发表于 2017-3-2 19:27
破膜剂的问题吧？

谢谢倪老师，这些天想着要换课题了。因为之前用这个破膜剂可以染出IFN-γ，所以想着应该不会是破膜剂。不知道会不会是LPS的问题，没有诱导出B10

niwanmao

JennyS 发表于 2017-3-15 12:54
谢谢倪老师，这些天想着要换课题了。因为之前用这个破膜剂可以染出IFN-γ，所以想着应该不会是破膜剂。不 ...

B10不刺激也应该有少量的呀。