又一篇：定量分析外周血固有免疫细胞和T细胞亚群

niwanmao

之前公众号推送过不少免疫细胞分析的文章，这次再来一篇，不同作者的思路，可能对我们检测免疫细胞也是一种参考。

这篇文章是2017年3月6日刚刚在线发表在Cytometry A上，文章名字叫《A flowcytometric analysis to efficiently quantify multiple innate immune cells and T Cell subsets  in human blood.》。

多种髓源性免疫细胞和T细胞亚群组成的群体平衡，及其活化状态和迁移到淋巴区域、炎症部位的能力，在疫苗临床试验中和针对癌症、创伤以及自身免疫和感染性疾病的治疗中，是很重要的指标。

因此，需要有效的方案以便用尽可能少的外周血获得尽可能多的免疫细胞变化指标。

文章介绍了两个15色方案。

抗体


方案1：
用于区分髓源免疫细胞群体，包括树突细胞（DC）、单核细胞衍生的抑制细胞（MO-MDSC）和单核细胞，并确定其成熟状态、T细胞刺激（或抑制）潜力和迁移能力。

设门步骤见下图，略做解读，FSC/SSC散点图排除掉碎片，同时圈绝对计数微球，接着通过FSC-H/FSC-W和SSC-H/SSC-W排除粘连细胞，再通过Zombie染料排除死细胞，后面就是正式分析了。CD33＋SSC中等的细胞群中，主要分析单核细胞（经典型、中间型、非经典型）和MO-MDSC；CD33＋SSC小的细胞群中，主要是分析DC各亚群（经典DC和浆样DC等）。

对圈出的这些免疫细胞，作者还分析了：
细胞活化/成熟指标（CD83、CD86、HLA-DR）、细胞迁移指标（CCR4、CCR7）、抑制信号（PD-L1）、对信号的反应能力（TNFR2）


方案2：
区分常见的T细胞亚群，及其迁移和功能调节能力。
设门步骤见下图，略做解读，与方案1类似，FSC/SSC散点图排除掉碎片，同时圈绝对计数微球，接着通过FSC-H/FSC-W和SSC-H/SSC-W排除粘连细胞，再通过Zombie染料排除死细胞。后面就是分析SSC小的淋巴细胞了，在CD56/CD3中选出T细胞、NKT细胞、NK细胞，T细胞根据CD4/CD8继续分为CD4＋T和CD8＋T，CD4＋T根据CD25/FoxP3继续分为Treg，CD8＋T根据CCR7/CD45RO分为记忆CD8+T和效应CD8+T。

对圈出的这些免疫细胞，作者还分析了：
细胞活化/成熟指标（CD45RO、CCR7）、细胞迁移指标（CCR4、CCR7）、程序性细胞死亡指标（PD-1、CD95）、对信号的反应能力（CTLA4、TNFR2）、TGF-beta释放（LAP）

如果需要阅读更多细节内容，请访问原文：
Draxler DF, Madondo MT, Hanafi G, Plebanski M, Medcalf RL. A flowcytometric analysis to efficiently quantify multiple innate immune cells and T Cell subsets  in human blood. Cytometry A. 2017 Mar 6. doi: 10.1002/cyto.a.23080.

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lionmilk

好东西，找来学习下！！

damaiyawo

CD8＋T根据CCR7/CD45RO分为记忆CD8+T和效应CD8+T。
这里是不是应该分成了CD8+中枢性记忆性T细胞和CD8+效应性记忆性T细胞啊？

niwanmao

damaiyawo 发表于 2018-4-11 09:25
CD8＋T根据CCR7/CD45RO分为记忆CD8+T和效应CD8+T。
这里是不是应该分成了CD8+中枢性记忆性T细胞和CD8+效应 ...

是的，可以按下图分为4类：