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[淋巴细胞相关] 最新图,仍然寻找Treg

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发表于 2017-4-10 19:07:20 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
见图,第一张图为单染CD4抗体,然后APC(CD25)的同型对照;
https://flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=attachment&aid=MTIyODJ8N2NlZjAwN2V8MTcxMzkyNzY5MXwwfA%3D%3D

第二张图为染CD4CD25抗体,做PE(foxp3)的同型对照;
https://flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=attachment&aid=MTIyODN8NGM1OTBmYjV8MTcxMzkyNzY5MXwwfA%3D%3D

第三张图为CD4  CD25  FOXP3的抗体都染了
https://flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=attachment&aid=MTIyODR8M2FhMWNhYWJ8MTcxMzkyNzY5MXwwfA%3D%3D

第四张图是第二张图的细胞重新收了一遍,将PE及APC的电压都调大了
https://flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=attachment&aid=MTIyODV8ZWRmYTY0MmJ8MTcxMzkyNzY5MXwwfA%3D%3D

第五张图是第三张图的细胞重新收了一遍,将PE及APC的电压都调大了
https://flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=attachment&aid=MTIyODZ8NTBmNGI5MmZ8MTcxMzkyNzY5MXwwfA%3D%3D

恳请各位专家帮忙分析我的CD4CD25FOXP3的细胞在哪里

组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2017-4-11 07:57:40 | 显示全部楼层
最后一个图可以这么圈。foxP3的抗体荧光强度特别弱,你可以尝试一下不同用量试试。如果还是和阴性细胞分不开,建议可以跟代理商反馈,要求退换。
屏幕快照 2017-04-11 上午7.55.02.png
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
 楼主| 发表于 2017-4-12 12:33:48 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2017-4-11 07:57
最后一个图可以这么圈。foxP3的抗体荧光强度特别弱,你可以尝试一下不同用量试试。如果还是和阴性细胞分不 ...

老师,您的意思是可以用红色的那个框圈?
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发表于 2017-4-12 19:15:55 | 显示全部楼层
cocoyan 发表于 2017-4-12 12:33
老师,您的意思是可以用红色的那个框圈?

可以圈,但是因为没有foxP3的荧光,可能会对发文章有影响,所以建议尽量还是先把破膜、foxp3抗体等问题解决掉再说。
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发表于 2017-4-12 23:59:55 | 显示全部楼层
你这个是Foxp3没染出来,注意查找你的破膜剂是不是FOXP3专用,一般的破膜剂是破胞膜,而FOXP3是需要破核膜的
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 楼主| 发表于 2017-4-13 06:37:29 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2017-4-12 19:15
可以圈,但是因为没有foxP3的荧光,可能会对发文章有影响,所以建议尽量还是先把破膜、foxp3抗体等问题解 ...

老师,我用补偿小球做补偿实验的时候PE—Foxp3是有荧光的
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 楼主| 发表于 2017-4-13 06:38:24 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2017-4-12 19:15
可以圈,但是因为没有foxP3的荧光,可能会对发文章有影响,所以建议尽量还是先把破膜、foxp3抗体等问题解 ...

咱的那个试用装我也申请了,也支付运费了,不知道什么时候能寄到
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 楼主| 发表于 2017-4-13 06:40:16 | 显示全部楼层
whyxa 发表于 2017-4-12 23:59
你这个是Foxp3没染出来,注意查找你的破膜剂是不是FOXP3专用,一般的破膜剂是破胞膜,而FOXP3是需要破核膜 ...

我用的BD公司的货号为562574的Transcription Factor Buffer破膜,老师您看这个破膜剂行吗?
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发表于 2017-4-13 08:08:09 | 显示全部楼层
cocoyan 发表于 2017-4-13 06:37
老师,我用补偿小球做补偿实验的时候PE—Foxp3是有荧光的

补偿微球调节补偿的原理是,这个微球可以与任何抗体结合,跟抗体质量无关。
MemMagician试用装这两天会寄出。
破膜剂你用的这个理论上应该是可以破核膜的,现在的关键还是逐一验证,如果破膜剂更换了仍无效,就得考虑foxP3抗体的问题了。
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 楼主| 发表于 2017-4-14 09:13:14 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2017-4-13 08:08
补偿微球调节补偿的原理是,这个微球可以与任何抗体结合,跟抗体质量无关。
MemMagician试用装这两天会寄 ...

老师这是我重新做了补偿实验,重新染的细胞,我怎么更找不到了。样本:
APC同型:
https://flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=attachment&aid=MTIzMTl8NWI0MTdjMGF8MTcxMzkyNzY5MXwwfA%3D%3D

PE同型
https://flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=attachment&aid=MTIzMjB8MDcyNGE5ODJ8MTcxMzkyNzY5MXwwfA%3D%3D

样本
https://flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=attachment&aid=MTIzMjF8YTQ0MTc4NzZ8MTcxMzkyNzY5MXwwfA%3D%3D
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