流式补偿问题

yangsinuo

请教个问题

同样的电压下，同一种荧光燃料的补偿会随分子表达水平的高低变化吗？谢谢

我想成大牛

变化肯定是会有的，不是说荧光不变补偿就不会变，需要看实际情况的。

niwanmao

基本不变，认为变化的，那是一种错觉，因为那种错觉缘于调节补偿的时候他用了中等或弱表达的标记来调节了。

但是需要记住，串联染料的补偿可能会变，因为不同批次之间，会存在一定差异。

但无论何种情况，不应该变化很大，例如从4跳到20，那是不可能的。如果变化大，首先要注意电压等仪器设置上的变化。

yangsinuo

倪老师的意思是如果用高表达的分子或者 beas 来调补偿，而待测样本的分子是表达，这种情况下的补偿基本是变得是吗？谢谢！我的意思是同一次实验，其他的参数不变，只是用于调补偿的细胞和样本的细胞不一样。

niwanmao

yangsinuo 发表于 2017-9-18 09:09
倪老师的意思是如果用高表达的分子或者 beas 来调补偿，而待测样本的分子是表达，这种情况下的补偿基本是变 ...

comp beads调节出来的补偿和细胞调节出来的补偿是不一致的。
至于不同种类细胞之间的补偿，倒是应该变化不太大，可能会存在微调，如果相差大，一般要么可能FSC和SSC相差大影响自发荧光，要么就是之前调节补偿的细胞该分子表达不够强，导致补偿不正确。

闷油瓶

niwanmao 发表于 2017-9-18 18:03
comp beads调节出来的补偿和细胞调节出来的补偿是不一致的。
至于不同种类细胞之间的补偿，倒是应该变化 ...

换了细胞，假如自发荧光变化大的话，之前的荧光补偿就不能用了吗？我感觉之前调补偿的时候只要阴性和单阳的自发荧光差不多就行了吧，后期再换细胞应该就不影响了吧，就像相面链接中您之前讲到的一样，我学到的是调节的时候最主要的是那个下降的角度问题，只要第一次补偿是对的，就说明给自己设置的的那个角度是对的，后期别管阴性细胞的自发荧光有多强，那个角度是正确的，就能把单阳的荧光调节到与相应的阴性细胞一致的水平线上来
https://www.flowcyto.cn/bbs/foru ... amp;_dsign=e241f03c

niwanmao

闷油瓶 发表于 2021-5-25 21:49
换了细胞，假如自发荧光变化大的话，之前的荧光补偿就不能用了吗？我感觉之前调补偿的时候只要阴性和单阳 ...

我前面的表述上可能也不是很恰当，准确地说，不叫自发荧光，而是颗粒由于FSC和SSC不同造成的本质差异，那么两者之间的补偿是不通用的。

闷油瓶

niwanmao 发表于 2021-5-26 07:39
我前面的表述上可能也不是很恰当，准确地说，不叫自发荧光，而是颗粒由于FSC和SSC不同造成的本质差异，那 ...

哦哦，好吧，这种本质差异最终结果不也是表现在调补偿的通道上吗？不太明白

niwanmao

闷油瓶 发表于 2021-5-26 08:39
哦哦，好吧，这种本质差异最终结果不也是表现在调补偿的通道上吗？不太明白 ...

根本原因还是在于补偿微球和细胞的性质不同，补偿微球是实心的，细胞是空心的。

如果你拿的是另一种细胞，即使FSC和SSC不同也是通用的。

闷油瓶

niwanmao 发表于 2021-5-26 10:17
根本原因还是在于补偿微球和细胞的性质不同，补偿微球是实心的，细胞是空心的。

如果你拿的是另一种细胞 ...

哦哦，明白了，我上面理解错了，我理解成你说细胞不同的话，如果FSC以及SSC差距大的话，不能通用。。看来细胞之间还是可以通用的