T细胞兄弟团，怎么把他们一一分开？

niwanmao

T细胞，是一支庞大的兄弟团，平时在咱们身体对抗外来细菌、病毒、真菌感染，监控体内细胞恶变中，兢兢业业。但是这支兄弟团的组成，可是对于整支队伍的战斗力评估有着很重要的含义。

在平时常规的淋巴细胞亚群分析（如下图）中，大多数是通过圈淋巴细胞门→通过FSC-H/FSC-W、SSC-H/SSC-W排除粘连体→ 排除死细胞，并选中CD3＋T→分别选择CD4＋T和CD8＋T，就结束了。


但两个团体还是很庞大的，需要继续细分。那么如何细分？



CD8+T
CD45家族的两种同型异构体——CD45RA、CD45RO，可区分出初始T（TN），因为TN表达CD45RA，而中央记忆（TCM）和效应型RA-（TE RA-）细胞表达CD45RO。
另一个检测TN和一部分记忆细胞的标记是CD62L，这是一种可将T细胞引导至淋巴结的L-选择素，但是这个标记的表达只能用新鲜分离的细胞，因为冷冻保存导致CD62L表达的显著降低。
没关系，还有其它选择，结合CD45RA/RO能精确定义表型不同的T细胞亚群。在这些标记物中，促进T细胞存活的TNF受体家族成员CD27、介导LN归巢的趋化因子受体CCR7和T细胞活化及存活所需的共刺激分子CD28 都是非常好的标记。而且这几个抗体的荧光素可选范围大，所以在多色方案中很适合。

下面是利用CD27、CD28、CCR7、CD45RA这4个标记完美区分TN (CD27+CD28+CCR7+CD45RA+)→早期分化型 (CD27+ CD28+CCR7−CD45RA−)→早期样(CD27−CD28+CCR7−CD45 RA−)→中间分化型(CD27+CD28−CCR7− CD45RA−) →TE RA+ (CD27−CD28−CCR7− CD45RA+)→TE RA- (CD27−CD28−CCR7−CD45RA−) →TCM (CD27+CD28+CCR7+CD45RA−)：

TN＝Naive T，初始T；TE＝Effector T，效应T；TCM＝Central Memory T，中央记忆T

在没有任何临床症状的病毒感染的健康个体中，初始和早期分化型是含量最高的CD8 + T细胞亚群。 在慢性感染巨细胞病毒（CMV）或HIV的人类中，TE RA+会变得相当高。

CD4+T
根据前述的标记，也可以将CD4＋T分为类似的功能亚群，不过，由于CD4＋T群体更为复杂，故需要增加更多的粘附分子和趋化因子标记。

Th1细胞对于细胞介导的免疫至关重要，因为它们产生大量的抗病毒IFNγ（IFN-γ）， Th1表达CXCR3，这个受体可以引导细胞至感染部位。 Th1表达的其他趋化因子受体是CCR5和CXCR6。

Th2细胞与其它白细胞（例如B细胞等）的活化有关，并与细胞因子IL-4、IL-5和IL-13的产生有关。 Th2细胞主要为CCR4＋，并可通过其他趋化因子受体（包括CCR3，CCR6，CCR8和CCR10 ）的表达不同进一步细分。当使用CCR4时需要注意，因为Th17和Th22也表达CCR4。

通过IL-9、IL-17和IL-22，可区分出传统的Th1和Th2亚型以外的Th亚型Th9、Th17、Th22。Th9表达CCR6、CXCR3、CCR3，由IFN调节因子4（IRF4）驱动，功能多样。促炎症Th17细胞在屏障部位清除胞外病原体十分重要。在人类中，Th17细胞可以通过CCR6和CD161的互斥表达识别。基于CXCR3（Th17 / Th1）和CCR4的选择性表达，Th17细胞可以进一步分为细胞毒性强和弱的两个亚群。一些研究已经证明，除了IL-17以外，一部分Th17还可以分泌IFN-γ，这些细胞通常被称为Th17/Th1细胞。最近Th17的第三个亚群被发现具有调节性T细胞特征。这些细胞可以通过IL-10的产生来识别，IL-10也是由常规的TREG细胞产生的。 Th17细胞的分化是由控制IL-17转录的RAR相关的孤儿受体γt（RORγt）的表达所驱动的。另外，皮肤归巢Th22细胞似乎受芳香烃受体（AHR）转录因子的调节，并且可以通过CCR6、CCR4和CCR10的相互表达来鉴定。

还有一类Th9，存在于次级淋巴组织的滤泡B细胞区域，表达CXCR5，辅助B细胞发育，还可表达PD-1、CXCR3、CCR6、IL-21。



免疫系统就如同我们身边的世界一般，每类细胞都执行各自的功能，但同时又是相互交叉、协作或拮抗的，从而形成一个微妙的平衡，目前我们的发现可能只是冰山一角，神秘的免疫细胞值得我们大家努力去探索。

文献源：
Cossarizza Andrea,Chang Hyun-Dong,Radbruch Andreas et al. Guidelines for the use of flow cytometry and cell sorting in immunological studies.[J] .Eur. J. Immunol., 2017, 47(10): 1584-1797.

何承光

谢谢，幸苦了。

peacheses

厉害了！