结肠固有层淋巴细胞的Th分析（针对th1/2/17/treg）

sujiyan1985

倪老师以及群里各位前辈，我准备分析小鼠结肠的固有层淋巴细胞中Th1、Th2、th17、treg比例。由于样品有限，我希望尽量在一个样品管检测上述四个亚群，请问用CD4+CD25+CD127low表征treg，是否合适？
我在BD产品中找到一个货号为560767的“th17/treg”套装。但这个套装的说明书步骤是在分选了cd4+细胞后，再进行操作，与我的目的有差异。我能否在提取了淋巴细胞后，这个套装的基础上，加上IFN、IL4、IL17A，达到我的目的？谢谢
产品链接：http://www.bdbiosciences.com/cn/applications/research/t-cell-immunology/th17-cells/intracellular-markers/cytokines-and-chemokines/mouse/mouse-th17treg-phenotyping-kit/p/560767

niwanmao

不需要分选。
你可以自己挑选单个抗体组成Panel。
CD3、CD4、CD25、foxP3、IL-4、IFN-g、IL-17A

sujiyan1985

niwanmao 发表于 2018-4-13 13:27
不需要分选。
你可以自己挑选单个抗体组成Panel。
CD3、CD4、CD25、foxP3、IL-4、IFN-g、IL-17A

好的，谢谢倪老师

sujiyan1985

niwanmao 发表于 2018-4-13 13:27
不需要分选。
你可以自己挑选单个抗体组成Panel。
CD3、CD4、CD25、foxP3、IL-4、IFN-g、IL-17A

倪老师，我这次的实验目的只是想分析给药和不给药情况下，受试动物肠固有层淋巴细胞几个Th亚群的比例变化。那么针对IL4、IFN-g，IL-17A，通常选用PMA/Ionomycin刺激，monomycin或者BFA阻断；对于Treg，是否需要加上TGF-β去刺激呢？谢谢

kesuzj

niwanmao 发表于 2018-4-13 13:27
不需要分选。
你可以自己挑选单个抗体组成Panel。
CD3、CD4、CD25、foxP3、IL-4、IFN-g、IL-17A

想问下老师Treg可以用IL-10或者TGF-β代替吗？

niwanmao

kesuzj 发表于 2021-7-6 16:17
想问下老师Treg可以用IL-10或者TGF-β代替吗？

可作为效应因子，但不能作为细胞定性的标记物。

大品咿呀哟

我做小肠的TH细胞亚群 尤其是TH17和Treg的balance 我一般的染色方案是CD3 CD4 FOXP3 IL-10 IL17A
刺激方式就是PMA+BFA+lonomycin

Dddddy1108

niwanmao 发表于 2018-4-13 13:27
不需要分选。
你可以自己挑选单个抗体组成Panel。
CD3、CD4、CD25、foxP3、IL-4、IFN-g、IL-17A

倪老师您好，如果使用PMA刺激4小时，CD4+的细胞不是会有明显减少，甚至消失的情况吗？那还怎么使用CD4作为Treg的标记呢？还是说Treg不需要用PMA进行刺激呢？

niwanmao

Dddddy1108 发表于 2021-8-18 21:24
倪老师您好，如果使用PMA刺激4小时，CD4+的细胞不是会有明显减少，甚至消失的情况吗？那还怎么使用CD4作 ...

CD4会发生内吞，之前很多帖子已经介绍过解决方法了，在此不多说，搜一下CD4关键词即可。