广告总在叫几十亿活的益生菌，敢用流式测一下吗？

niwanmao

在食品工业中，各类乳酸菌（LAB）用于生产发酵食品，例如奶酪、酸奶、葡萄酒和发酵肉制品，现在乳酸菌、双歧杆菌等益生菌更是被包装成饮料、冲剂或胶囊，用于治疗或胃肠调理。 这些菌种的活性和数量，对于发酵产品的风味很重要，对于益生菌饮料和药物，更是其效果的关键。

所以有必要了解一下计数活菌的方法，到时候咱们自己可以用流式细胞仪这个火眼金睛来鉴别市场上的产品是否达标。当然，也可以用来了解牛奶等食品的细菌量是否超量。

评估微生物活性，最常用的方法就是平板计数法。


平板计数需要数天的孵育时间才能对结果进行评分，这是一个缺点。此外，细菌可能以链或团块的形式出现，导致低估了细菌数量；细胞损伤和休眠也可能导致活菌数低；平板计数方法仅检测在所使用的培养基和给定环境下能够形成菌落的细菌，却无法计数那些不形成菌落的细菌，而实际上那些活跃但不可培养的细菌可能更有助于发酵。


用流式细胞术，可以更快、更省力地鉴定出死菌和活菌。


下图是平板计数法和流式法的流程对比：



那么用SYTO9和PI，就可以方便快速对细菌进行计数和死活鉴别了。

先看未染色的发酵乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的FSC/SSC散点图：


检测发酵乳杆菌，在SYTO9/SSC图上，可良好区分活菌（绿色）和死菌（红色），并能得到准确计数结果：


在鼠李糖乳杆菌中，结合SYTO9/PI，可更清晰地区分出活菌（绿色）和死菌（蓝色）：


嗜酸乳杆菌，同样可用SYTO9/PI轻松区分，并得到准确计数结果：



下图是长双歧杆菌的SYTO9/PI染色及其计数结果：



至此，我们就知道了流式检测死菌、活菌的超简便方法，这方法也可以用来检测食品污染情况。平时用流式来掌控自己的食品质量，挺好，只是SYTO9染料成本略贵：）



参考：
1、https://www.youtube.com/watch?v=B_TLMld77xY
2、Bunthof CJ, Abee T. Development of a Flow Cytometric Method To Analyze Subpopulations of Bacteria in Probiotic Products and Dairy Starters. Applied and Environmental Microbiology. 2002;68(6):2934-2942. doi:10.1128/AEM.68.6.2934-2942.2002.