新时代，流式在成熟B细胞肿瘤诊断中究竟起着什么作用？

niwanmao

随着其它诊断手段的纳入，以及新的治疗方案的出现，流式在成熟B细胞肿瘤诊断中的作用已会有所变化，看一下2018年底这篇综述讲些什么吧。

成熟B细胞肿瘤是一组异质性疾病，临床表现（可表现为白血病或淋巴瘤形式）、病理特征和结果差异很大，但它们都来源于B细胞系，具有克隆性，并且具有成熟B细胞的形态学、免疫表型和遗传特征。

流式细胞术已经成为成熟B细胞肿瘤的有力诊断工具，在评估外周血、骨髓、体液和组织活检样本中具有很强的实用性。然而，随着其他方式如分子检测被纳入淋巴肿瘤的诊断检查，以及新治疗方案的出现，流式的作用也发生了一定的变化，2018年12月Cytometry B杂志上的这篇综述详细讨论了流式在成熟B细胞淋巴肿瘤的诊断和亚分类、预后评估、治疗靶点的鉴定以及疾病对治疗反应的评估，让我们能够重新定位流式在新时代中的作用。

诊断和亚分类
流式在诊断B细胞肿瘤中的两个最基本的作用是：
（1）确定系列来源
通常采用CD19、CD20、CD22和CD79。
一般与SSC参数结合分析。


(2)区分肿瘤和非肿瘤B细胞。
大多通过评估免疫球蛋白（Ig）轻链限制和异常抗原表达来鉴别。
反应性B细胞，一般轻链无限制性表达：


肿瘤性B细胞轻链存在限制性，例如下面这例是lambda单型性表达：


这例是CLL，kappa弱表达：


下面这例是多克隆性高球蛋白血症，存在部分lambda和kappa共表达的B细胞：


对于轻链限制性的问题，还得关注一些CD19强度减弱，又有正常B细胞掺杂的病例，很容易漏诊（下图中存在一类CD19弱表达、FSC增大的异常B细胞，呈lambda限制性表达，如果不单独圈出这群细胞，就容易漏掉）：


CLL/SLL常常会出现轻链弱表达或缺失。但需关注的是，正常B细胞也可以出现轻链缺失或下调，主要在以下几类细胞中：
体液
正常中期或早期B
生发中心B细胞
滤泡增生
至于亚分类，一般根据CD5、CD10这两个进行初步分类，然后再进行亚分类，该篇综述汇总出了下面这个表格，比较实用：


不过我们之前发过三篇详细讲解的帖子，可能比这个表更实用：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5033-1-1.html
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5036-1-1.html
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5040-1-1.html

流式与靶点确定、治疗决策
除了协助成熟B细胞淋巴肿瘤的诊断和分类外，流式细胞免疫表型分析在免疫治疗靶点的检测中发挥着重要作用。潜在的治疗选择包括针对B细胞相关抗原CD20，CD22和CD79的单克隆抗体、抗体药物偶联物（ADC，如抗CD22和抗CD79b ADC微管破坏剂monomethyl auristatin E （MMAE）、CD19 CAR-T细胞。
通过流式细胞术测量抗原靶标的密度，预测单克隆抗体疗法的反应。

在治疗之后，流式可以通过MRD检测，了解治疗效果。但在目前这些靶向治疗之后，MRD需要关注的是靶分子的表达改变，例如下图这例CLL患者，在CD19 CAR-T细胞治疗前，CD19表达良好（下图A、B），但在治疗之后，就变成C－F图那样，CD19转阴，但其它标记与初发类似，因为在做MRD设门时特别要小心：


这类问题的对策，我们之前在论坛上也发过两个帖子，请扫下面的二维码阅读：
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5662-1-1.html
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-6712-1-1.html

观点
流式中文网认为，虽然随着基因分类的渗透，以及其它诊断手段（如PET等）出现，流式的诊断地位有一定的弱化，但流式有着其它诊断手段不一般的优势，一是快速，二是可以利用少量样本即可诊断（例如脑脊液、穿刺样本等，在这里友情提醒一下使用保存液能够得到更好的结果，见文末动图），三是对靶向治疗可行性的评估，四是对MRD的监测能力，即使是髓外样本，只要能穿的到就可以。
目前，流式诊断B细胞肿瘤的弱点在于非典型表型淋巴瘤亚型的确诊上，此时可能只能结合病理和基因结果，但是，我们不能把流式作为一种孤立的技术，如果我们把流式分选和单细胞测序结合起来，实现的诊断是不是就能更精准了呢？

最后，再附上一篇曾经的热帖《B细胞分化与淋巴瘤》，是病理大牛的讲话内容，但对流式诊断淋巴瘤非常有用，可能很多人看到过，但对于新入门的FLOWER，是不可多得的好材料：
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-4828-1-1.html

参考文献：Seegmiller AC, Hsi ED, Craig FE. The current role of clinical flow cytometry in the evaluation of mature B-cell neoplasms. Cytometry B Clin Cytom. 2018 Dec 13. doi: 10.1002/cyto.b.21756.

zhang4083

挺好的总结