样本处理问题

stars

图一：

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             图二  :

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图三:      

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请教各位老师前辈,图一到图三都是外周血的流式图,图一和图图形看起来就比较正常,图三是打了孔的,看起来图形就有点奇怪,请问图三是打孔导致的,还是样本没处理好,具体的原因又可能是哪些呢?

niwanmao

固定＋破膜之后，细胞FSC和SSC均会发生不同程度的改变，是可以的。
如果要做淋巴细胞，强烈建议加一个CD45，用CD45/SSC设门。

stars

倪老师，还想请问您一个问题：外周血未打孔时，CD45阳性比例不超过1%，但是打孔后CD45的阳性比例达到了50%左右，这是正常现象吗？出现这样的情况，是因为白细胞被破坏后一个细胞变成多个碎片，所以数量增加了吗？还是其他的原因呢？@niwanmao

niwanmao

stars 发表于 2019-5-4 10:26
倪老师，还想请问您一个问题：外周血未打孔时，CD45阳性比例不超过1%，但是打孔后CD45的阳性比例达到了50% ...

1、白细胞，为什么CD45＋比例不超过1％？？这是有问题的。
2、破膜之后，荧光强度本就会偏移。

stars

我说的CD45+的比例是占外周血 全血的比例，第一个门就是把所有的细胞都划进去了，然后单细胞、死活设门，接下来就是CD45,我觉得设门的时候是没有问题的，分析下来的CD45+的比例确实是这样的，倪老师，这样的比例是完全不对的吗？是否是因为破红不好，导致的CD45+的比例如此低，或者是还有其他什么原因吗？@niwanmao

niwanmao

stars 发表于 2019-5-7 08:42
我说的CD45+的比例是占外周血 全血的比例，第一个门就是把所有的细胞都划进去了，然后单细胞、死活设门，接 ...

如果CD45阳性率只有1％，这说明99％都是红细胞和碎片，肯定是裂解不好了。
裂解的好，一般全血白细胞比例（CD45阳性率）应该在百分之八九十