流式细胞总数测定

qiany0121

流式小白咨询一下，目前已经了解流式测各种标记的细胞在总共细胞里面的比例，然后知道某某阳性占多少。

但是，有些文章直接就说某细胞数量是多少，另外一个细胞数量又是多少，请问那是怎么测的？
比如说，从血里面取的细胞，可能是1ml里面含有多少个ABC细胞，但是如果你是从组织液或者器官里面取出来的单个核细胞，你怎么来给出结论，某个细胞数量是 10的多少次方？因为取材你也不可能完全取干净。一直不明白细胞总量的值是怎么个测法和表示，望请解答。谢谢诶

niwanmao

你说的是绝对数吧。
要测细胞绝对数，需要用已知浓度的绝对计数微球加进去，通过公式计算。
例如微球浓度1000个/ul，那么加入10ul微球，你就知道加入了1万个微球。此时的样本体积是100ul，那么微球在样本中的浓度就是100/ul，通过这个已知的浓度，我们通过细胞与微球之间的比例，就可以计算出细胞的浓度，最后乘以原样本的体积，就是细胞总数量。

qiany0121

niwanmao 发表于 2019-5-13 15:11
你说的是绝对数吧。
要测细胞绝对数，需要用已知浓度的绝对计数微球加进去，通过公式计算。
例如微球浓度10 ...

理解力，谢谢老师

qiany0121

niwanmao 发表于 2019-5-13 15:11
你说的是绝对数吧。
要测细胞绝对数，需要用已知浓度的绝对计数微球加进去，通过公式计算。
例如微球浓度10 ...

感谢老师回复。

那再问一下，需要考虑进去一些操作过程中的丢失的细胞吗？

脾脏，淋巴结，胸腺等直接研磨然后标记处理测结果，这个取的就是一整个的，给出绝对数也说的明白。

但是，
比如血里面的绝对数，只能取一部分的血进行测量，不同动物的血量不一样，那就只能估算吗？
谢谢

niwanmao

qiany0121 发表于 2019-5-15 01:45
感谢老师回复。

那再问一下，需要考虑进去一些操作过程中的丢失的细胞吗？

组织样本不建议，你无法通过这样估算绝对数，只能通过称量体积和重量。
至于血，我前面说的绝对数，指的是浓度，例如1000个细胞/ul