做细胞因子定量检测的FLOWER注意抗凝剂和温度，会影响结果

niwanmao

做细胞因子定量检测的FLOWER注意抗凝剂和温度，会影响结果

定量检测游离细胞因子，科研或临床中既有用血清，也有用血浆，既有用EDTA抗凝，也有用肝素抗凝，既有室温保存，也有4度保存或－20度保存。究竟什么样的条件最好呢？

挪威的Linda Torrissen Hennø等人2017年发表的一篇《Effect of the anticoagulant, storage time and temperature of blood samples on the concentrations of 27 multiplex assayed cytokines – Consequences for defining reference values in healthy humans》文章较好的给我们展示了不同条件的影响。

采样条件
采样条件极大地影响细胞因子水平。通常，与血浆相比，血清收集管采集的血清样本细胞因子相对较高，原因由于凝血过程和凝血酶活化增加了细胞因子的释放。 血浆样本在离心和分离后，细胞因子水平就能保持稳定。相反，如果不分离，全血样品容易导致许多细胞因子升高，尤其是室温保存更明显，这与细胞在体外释放细胞因子有关。 从保存在碎冰上的EDTA抗凝全血中获得的血浆（<1小时），细胞因子水平最低。

温度
在抗凝全血中，即使在EDTA存在下，当样品在室温下储存时，许多细胞因子的水平也会增加。 这些结果可能是由于白细胞体外合成或释放预合成的细胞因子，但可以通过低温保存预防。 有趣的是，如果该样本中加入特异性抑制凝血酶活性的lepirudin，仅观察到PDGF-BB、IL-6、IL-8和IL-13的少量增加，表明凝血酶参与这些细胞因子的释放。 血浆分离后，细胞因子相对稳定，尽管也会受到时间和温度的一定影响。 在室温下储存长达24小时导致少数细胞因子减少或增加，减少可能与血浆中某些细胞因子的稳定性较低、蛋白酶降解或细胞因子与其各自可溶性细胞受体的结合有关。 但在4℃下，EDTA血浆中储存长达4小时没有细胞因子发生变化。

抗凝剂
应避免使用肝素抗凝，因为有些细胞因子，特别是CCL4（MIP-1β）和CCL2（MCP-1）的水平会升高，原因仍有待阐明，但推测可能是由于肝素会激活全血中的单核细胞释放细胞因子。 因此，在可用的抗凝血剂中，EDTA是细胞因子优选的抗凝血剂。

综合上面三个条件的影响，我们建议采用EDTA抗凝全血收集细胞因子样本，收集后将全血样品置于冰上（0°C）并立即离心，如无法立即离心，建议4°C条件下最多保存4小时必须得离心分离出血浆。分离出以后，尽量储存在-80°C。以后最多可以将血浆冻融三次。