细胞因子检测，都是细胞碎片，无法圈门？

细胞因子2019

细胞因子检测，都是细胞碎片，无法圈门？求解 步骤如下： 5.1用含10%血清的1640完全培养基将Cell Stimulation Cocktail（500X）稀释成工作浓度（1×），在1.5 ml EP管中使用500μl上述稀释液将PBMC或分离的肿瘤浸润淋巴细胞重悬，转移至24孔板中，37℃培养箱刺激3 h； 5.2取出24孔板吹下细胞，剩下贴壁细胞用胰酶消化后吹下，一并转移至1.5ml EP管中，1500 rpm离心5 min； 5.3 弃上清，加入1 mlFACS buffer重悬细胞，1500 rpm离心5 min，弃上清，加入100μl FACS buffer重悬细胞； 5.4胞外表面染色：加入稀释好的流式抗体避光染色15min； 5.5固定：加入1 ml FACS buffer混匀后1500rpm离心5 min，弃上清，加入100μl 2% PFA 重悬细胞，室温固定30 min； 5.6穿膜并染色：加入1 ml FACS buffer混匀后1500rpm离心5 min，弃上清，加入50 μl含流式抗体的0.1%Triton，室温穿膜染色30 min； 5.7加入1 ml FACS buffer混匀后1500rpm离心5 min，弃上清，加入100μl FACS buffer重悬，流式上机。

niwanmao

triton X-100很容易导致细胞裂掉。建议采用商品化的破膜剂。

细胞因子2019

niwanmao 发表于 2019-8-21 20:04
triton X-100很容易导致细胞裂掉。建议采用商品化的破膜剂。

我们是将triton X-100母液用1×PBS稀释成0.1%的工作液使用的，不知老师说的商品化的破膜剂是指？

Cleopatra

细胞因子2019 发表于 2019-8-22 09:02
我们是将triton X-100母液用1×PBS稀释成0.1%的工作液使用的，不知老师说的商品化的破膜剂是指？ ...

biolegend和invitrogen两家都有破膜剂套餐

niwanmao

细胞因子2019 发表于 2019-8-22 09:02
我们是将triton X-100母液用1×PBS稀释成0.1%的工作液使用的，不知老师说的商品化的破膜剂是指？ ...

商品化太多了，BD/Beckman/Biolegend/Thermo Fisher，甚至还有我们也有：）