流式实验中电压和抗体滴定的优化先后顺序是什么？

945860216xy

在流式实验的优化中，抗体滴定和电压优化是很重要的两项内容，不同的抗体用量和不同的电压都会对图形的分群产生影响，但是在进行优化的过程中，我有一点很疑惑，我个人认为，抗体滴定需要在同样的电压下（最优电压）才能比较，而电压的优化应该是在同样的抗体用量（最优用量）下进行优化，但是在某个抗体的最佳用量和最佳电压我们都不知道的情况下，我们应该先优化哪个呢？还是说要将电压和抗体用量做正交实验同时优化？这类似于一个先有鸡还是先有蛋的问题，请各位老师为我解惑。

niwanmao

电压是根据你一个已知用量的抗体进行优化的。
如果全然不知，建议你先电压，再进行抗体滴定。

945860216xy

niwanmao 发表于 2019-9-18 21:18
电压是根据你一个已知用量的抗体进行优化的。
如果全然不知，建议你先电压，再进行抗体滴定。 ...

假设我们一开始的用量并不合适，那用这个用量优化出来的电压在抗体滴定时是否能正确的得到最佳用量呢？还是说电压对染色效果的影响程度相对宽泛，偏差的不多影响不大，依旧可以用一个大概合适的电压得到最佳用量？

niwanmao

945860216xy 发表于 2019-9-19 09:22
假设我们一开始的用量并不合适，那用这个用量优化出来的电压在抗体滴定时是否能正确的得到最佳用量呢？还 ...

抗体浓度是最关键的，电压的优化，有的是方法，不用抗体也能确定最优电压的呀，例如8峰微球的第2峰、LED法，站内搜一下（电压  优化）关键词即可。

南瓜妹妹

niwanmao 发表于 2019-9-19 14:15
抗体浓度是最关键的，电压的优化，有的是方法，不用抗体也能确定最优电压的呀，例如8峰微球的第2峰、LED ...

倪老师，想咨询一下关于补偿微球电压的问题，补偿微球每个荧光通道的电压和样本管相对应的电压必须一致吗？好像很难达到一致，还有微球的FSC和SSA与样本管也必须一致吗？

niwanmao

南瓜妹妹 发表于 2020-1-2 19:27
倪老师，想咨询一下关于补偿微球电压的问题，补偿微球每个荧光通道的电压和样本管相对应的电压必须一致吗 ...

电压是先用空白样本大致定下来的。如果需要明确的优化电压，那么请参考以前的帖子：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5478-1-1.html

电压确定下来之后，再跑补偿微球，调节补偿。但通常最后上样本的时候，还是需要另外微调的。