流式染色过程中的一些小问题

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1、裂红在需要进行体外培养时，样本细胞经常需要用红细胞裂解液进行处理，但是这对细胞活性有一定影响，是否能在染色后再进行裂红？
2、粘连体处理、分析
在实验过程中，经常会发现有粘连体（尤其是贴壁培养的细胞），无论是胰酶消化还是直接刮下都不是特别好的选择，staining buffer（PBS+BSA或FBS）中能否加入一些EDTA，是否会对染色有影响？

3、如何控制染色时体积一致？目前我们实验室是在上一步离心后直接倾倒，剩下来的在流式管中的液体体积大概是100μl左右，实际上50-150都有可能，感觉对某些结果影响很大，不知道各位大神是如何控制体积一致的？

土星人

1.可以先染色后裂红的
3.我是用负压吸上清，流式管底有一条线，我每次都留那么多