异倍体如何分析

maolina

大家好，在做细胞周期分析时，遇到以下问题，不是很懂，请大家不吝赐教！
我做的是药物作用对肿瘤细胞周期的捕获，理论上药物能够将肿瘤细胞周期抑制于G2/M期。
我用未经药物处理的肿瘤细胞作为阴性对照，能看到有个非整倍体峰，分析结果如下：

低浓度的药物作用后，从峰形比较乱，按照上图的设置进行分析，结果如下：

药物作用细胞周期分布

经分析，结果应该是可接受的吧？

现在有一个问题，样品细胞圈群的时候，如果把绿色圈内细胞也进行分析，套用上面的设置，最终无法拟合（对照中是没有这群细胞的）：

请教几个问题：
1. 第二个图样品分析的结果是否准确？
2. 我圈的凋亡群体对吗？对于这个样品是否应进行凋亡分析？
3. 绿色圈中的细胞是异倍体吗？是否应进行分析？
4. 如果分析的话，应该如何设置呢？
5. 这是我之前分析的一个数据，这样就没办法分析DI在1.1左右的细胞了，请问用哪个结果表述更合适呢？

6. 是不是不管哪种分析方式，只要结果诊断部分是Good或者Fair就可以接受？
真诚地感谢大家！

niwanmao

我觉得你最好有个二倍体参照，不仅是单个二倍体参照，而且还要有一个掺杂了二倍体参照物的样本。
这样才能充分了解二倍体所在的峰，从而确定异倍体。

绿色那个门应该是异倍体。

sunzheng_99

1   个人认为 结果诊断部分是Good或者Fair就可以接受
2  凋亡锋应该在前 异倍应该在后（确定了2倍）
3  软件模式有选择倍体。。。
4 拟合的数值 以你的实验图形为主，达到最大拟合即可

maolina

niwanmao 发表于 2020-4-22 14:03
我觉得你最好有个二倍体参照，不仅是单个二倍体参照，而且还要有一个掺杂了二倍体参照物的样本。
这样才能 ...

倪老师，我这个阴性对照和样品是相同的细胞，一个加药物一个没有加药物，您所谓的“掺杂了二倍体参照物的样本”，是指上样测试之前把两个样品混在一起测试吗？
还有请问一下，假设我的样品没有绿色圈的异倍体，用图2的分析方法是正确的吗？需不需要分析凋亡细胞？谢谢您！

niwanmao

maolina 发表于 2020-4-22 14:45
倪老师，我这个阴性对照和样品是相同的细胞，一个加药物一个没有加药物，您所谓的“掺杂了二倍体参照物的 ...

我的意思是，要用已知二倍体并且只有单纯一个G0/G1峰的细胞，这里未加药物的样本，如果无法确保是是这个状态的话，不能用作倍体参照的。
你这里放的位置是否正确，我无法判断，因为没有倍体参照，很难明确位置是对是错。

maolina

sunzheng_99 发表于 2020-4-22 14:43
1   个人认为 结果诊断部分是Good或者Fair就可以接受
2  凋亡锋应该在前 异倍应该在后（确定了2倍）
3  软 ...

好的，非常感谢！

maolina

niwanmao 发表于 2020-4-22 15:40
我的意思是，要用已知二倍体并且只有单纯一个G0/G1峰的细胞，这里未加药物的样本，如果无法确保是是这个 ...

明白了，谢谢倪老师！我后面实验再加个对照，谢谢

sunzheng_99

我的做法  1  把正常人淋巴细胞作周期染色，混在你的样本里一起检测，但是由于细胞也许种类大小不一 会影响判断
                2 把正常人淋巴细胞作周期染色，上机记录FSC SSC  PI电压，调整锋至50后不动（因为确定是2倍体），上你的
                   样本。

maolina

sunzheng_99 发表于 2020-4-23 08:24
我的做法  1  把正常人淋巴细胞作周期染色，混在你的样本里一起检测，但是由于细胞也许种类大小不一 会影响 ...

好的，我后面再做的时候试试，感谢！

tiger

maolina 发表于 2020-4-24 08:38
好的，我后面再做的时候试试，感谢！

再仔细看一下，未经处理的细胞是否也有少量的异倍体细胞？