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标题：流式检测细胞自噬？
可否用流式检测药物作用后细胞自噬的情况？
比如用吖啶橙染色。。。
问题补充： 为什么需要破膜呢？
我们这教的是直接拿配好的吖啶橙染贴壁细胞，然后消化，用含10%FBS的PBS终止消化后直接上流式检查。。因为是单染，所以不是很清楚怎么区分阳性细胞群。
要是能有几张标准的流式图看看就好了、、、
谢谢高手了。。。
回答者：niwanmao
当然可以用吖啶橙来检测细胞中的酸性囊泡，来反应细胞自噬程度。
大概在2008年我帮别人测过，具体方法我当时从Current protocol in cytometry中翻译过，请参见如下：
材料：
- 细胞密度≤106/ml，悬浮在包含10％血清的培养基中
- 吖啶橙染液，冰冷（详细配制见文末 。AO-DNA或AO-RNA的激发波长为488nm，发射波长分别为530±15nm[FL1]、640nm[FL3]）
- 细胞破膜剂，冰冷（详细配制见文末）
具体步骤：
- 转移0.2ml细胞悬液到流式管中，置于冰上。（0.2ml应该有≤2×105的细胞，培养基中的10％血清或1％的BSA可以保护细胞以免被去污剂裂解）
- 轻轻加入0.4ml冰冷的细胞破膜剂，置于冰上等待15秒钟。
- 轻轻加入1.2ml冰冷的吖啶橙染液，置于冰上，避光。
- 在加入吖啶橙染液后的2～10分钟内检测和记录细胞的荧光。（注意：检测前和检测中标本都应该置于冰上。如果以涡旋振荡或注射方式把细胞加入破膜剂中，尤其是在没有血清或其它蛋白保护时，可能会导致胞膜破裂或胞核分离出来。）
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2009年8月12日 0:54
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