请教淋巴细胞刺激后CFSE增殖分析

yyx · 发表于 2018-12-26 22:54:10

各位老师好，新学习淋巴细胞刺激。我想通过CFSE标记看看刺激后CD3细胞群体的增殖情况，所以分离了白膜层的PBMC，CFSE标记后进行PHA刺激，5天之后标记CD3-PE-Cy7，机器是beckman的cytoflex但是不会分析结果了，首先第一波圈门就不知道哪群细胞，和外周血PBMC的图完全不一样啊，哪位有经验的老师能帮忙分析一下么，感激不尽。
FCS文件见附件

wanqing0713 · 发表于 2019-1-23 09:34:34

打开都在边缘，电压是不是要重新调啊

mybiosciences · 发表于 2019-1-25 23:35:58

做CFSE要注意以下几点：
1.注意CFSE的标记浓度和标记时间，浓度过高时间过长都会导致细胞不生长，可参考附件中的文献2.标记24h后用未标记的细胞和标记的细胞确定好CFSE（FITC通道）的电压
3.培养过程中肯定会有死细胞产生，一定加区分死活的染料用来排除死细胞

yyx · 发表于 2019-2-22 14:45:36

谢谢，过年期间没上网，都没发现热心帮忙了

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