免疫分型标本处理中的细节

niwanmao

有些时候，我发现同一批处理的标本中，抗体的荧光表达发生变异，例如，我们做了6管，CD45-SSC设门的图，同一个标本应该改变不大，但是有时候会发现，1、2、3、5、6的都一样，偏偏4就CD45掉下去许多；或者成熟单核细胞应该CD11b高表达，但在图上却只能看到中等表达。。。。

什么原因呢？步骤都没问题啊。

今天，在两位同事处理标本时，我注意了一下，发现了两个细节：
1、加完抗体后，有几管有些许抗体粘在上样管上部。
2、加完标本，有几管标本（骨髓或者外周血）少量粘在上样管中部或上部。

这两个细节，均可能导致结果出现多多少少的异常。前者，可能会导致抗体量不足，后者，可能导致部分细胞没染上抗体。均会产生假阴性，导致结果的异常。

所以，建议大家在处理标本是，加完抗体和标本后，用700-800转/分，瞬时离心一下，将抗体和标本都离到底部，然后再震荡，这样才能保证抗体和标本的充分混合。

immunology1988

我处理样本的时候，会使用移液器缓慢吸掉底部留存的液体，但吸取的时候动作要缓慢轻柔，不然很容易将样本“搅动”，这样就比较麻烦了。

hmily

如果是做胞内的标记，个人觉得在加胞内抗体前的洗涤去上清也很重要，一般用200g以上的离心力基本可以把细胞保留在管底的了，这时去上清液时需要“心狠手辣”的直接倒干净，然后在吸水纸上吸干残留的PBS（管一直处于倒置样），不然加胞内抗体时由于残留液体过多导致抗体浓度降低，会影响结合的效果。之前没有注意到这点，偶尔会有个别管会染不上，后来注意了一下，基本就都可以染上，结果也还比较稳定。

蹦蹦豆

赞同，我在做的过程中也有时候会发现这样的问题

jingweis530

我也遇见过，茅塞顿开。

oky

我用了同样的方法处理

柠檬果秋秋

hmily 发表于 2012-8-16 13:48
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请教老师，加抗体前上清要尽量弃干还是留少许？

niwanmao

柠檬果秋秋 发表于 2017-2-15 10:14
请教老师，加抗体前上清要尽量弃干还是留少许？

尽量去干净，但不可能完全去光的，就是倒过来，姿势不变，在纸巾上轻轻碰一下，将管口的液体吸干即可。

五味瓶JJJ

学习了

ponyo

每次我们弃上清时都要将管子倾斜45度角，用移液器吸净，这样避免留的残液不一致导致细胞浓度有所变化。