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[凋亡检测] 急求线粒体膜电位JC-1的上机操作步骤及注意事项

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发表于 2012-6-19 17:53:41 | 显示全部楼层 |阅读模式
3流星
各位朋友,因要做线粒体膜电位JC-1检测,论坛里的资料是涉及实验原理和染色步骤的,但我想要的是流式细胞仪上的操作步骤以及操作过程中的一些注意事项,如果有哪位朋友曾经做过,请不吝赐教,非常感谢。我用的仪器是BD的FACS Callibur。

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这个不需要的。你只要把正常细胞在FL1/FL2散点图的位置调节到右上方位置,然后继续上样,就可以圈中其FL1增高、FL2降低的细胞,分析其比例。典型的图就是上面那个链接里面有的。
发表于 2012-6-19 17:53:42 | 显示全部楼层

这个不需要的。你只要把正常细胞在FL1/FL2散点图的位置调节到右上方位置,然后继续上样,就可以圈中其FL1增高、FL2降低的细胞,分析其比例。典型的图就是上面那个链接里面有的。
发表于 2012-6-19 19:47:35 | 显示全部楼层
操作步骤不是染色步骤吗?你是不是指如何分析结果?
 楼主| 发表于 2012-6-19 21:12:11 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2012-6-19 19:47
操作步骤不是染色步骤吗?你是不是指如何分析结果?

倪老师,不是的,我的意思是在仪器上如何画图,因为没做过,所以有点糊涂。是像做周期这么画图呢,画散点图,还是像凋亡那样画直方图
发表于 2012-6-19 21:57:51 | 显示全部楼层
蓝白小熊 发表于 2012-6-19 21:12
倪老师,不是的,我的意思是在仪器上如何画图,因为没做过,所以有点糊涂。是像做周期这么画图呢,画散点 ...

哦,那就是分析了。
这个帖子不是既有步骤又有分析实例?http://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=viewthread&tid=188

首先用fsc/ssc散点图圈中要分析的细胞,然后画fl-1/fl-2散点图,查看fl-1增强而fl-2降低的细胞比例。
 楼主| 发表于 2012-6-20 08:36:25 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2012-6-19 21:57
哦,那就是分析了。
这个帖子不是既有步骤又有分析实例?http://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=view ...

倪老师,谢谢,我就是在画图上不太明白,嘿嘿嘿,想再问问你,那样品分组我应该怎么分啊,需不需要像AnnexinV-FITC/PI染色那样设置FITC和PI的单染组呢?
 楼主| 发表于 2012-6-20 10:27:57 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2012-6-19 17:53
这个不需要的。你只要把正常细胞在FL1/FL2散点图的位置调节到右上方位置,然后继续上样,就可以圈中其FL1 ...

倪老师,非常感谢,我明天试试,如果到时候有什么问题肯定要再请教你哦
发表于 2012-6-20 11:08:40 | 显示全部楼层
蓝白小熊 发表于 2012-6-20 10:27
倪老师,非常感谢,我明天试试,如果到时候有什么问题肯定要再请教你哦 ...

欢迎欢迎。我也同时复习一下:)
 楼主| 发表于 2012-6-20 17:24:57 | 显示全部楼层
本帖最后由 蓝白小熊 于 2012-6-20 17:27 编辑
niwanmao 发表于 2012-6-20 11:08
欢迎欢迎。我也同时复习一下:)


倪老师,现在想到几个细节问题,想咨询一下。
1、FL1和FL2散点图应采用Lin模式还是Log模式?2、正常细胞也需要用JC-1染色吗?如果用JC-1染色,会不会在左下象限像做凋亡那样出现阴性细胞群?3、如果实验组是加药诱导的肿瘤细胞,那这个所谓的正常细胞是未加药诱导的肿瘤细胞还是正常的组织细胞?4、既然正常细胞是呈红色荧光,就应该在左上位置啊,为什么在右上位置呢?
非常感谢,麻烦倪老师啦
发表于 2012-6-20 21:13:22 | 显示全部楼层
蓝白小熊 发表于 2012-6-20 17:24
倪老师,现在想到几个细节问题,想咨询一下。
1、FL1和FL2散点图应采用Lin模式还是Log模式?2、正常细胞 ...

1、log模式
2、正常细胞是在非肿瘤细胞?那不需要的,只要不加药的肿瘤细胞即可
3、你做的是肿瘤细胞,所以正常组应该是未加药的肿瘤细胞
4、正常细胞线粒体膜点位正常,但是jc-1肯定也会有单体存在,所以在fl1/fl2点图上应该位于右上象限,但是不要调的太偏右,因为出现线粒体膜点位下降的细胞fl1会增高。
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