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使用JC-1检测线粒体膜电位

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发表于 2010-8-1 16:42:49 | 显示全部楼层 |阅读模式
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发表于 2012-12-19 08:22:34 | 显示全部楼层
倪老师,请问这个绿光和红光之间是不是应该调节补偿呢?CCP处理后的全部是绿光(用来调节PE-FITC)?正常细胞全部发红光(用来调节FITC-PE)?是这样的吗?
 楼主| 发表于 2012-12-19 09:10:05 | 显示全部楼层

一般可以适当调节,以便使正常细胞在fl1/fl2散点图上位于右上且呈椭圆形,发生线粒体膜电位降低的细胞,会发生fl2降低而fl1略增高,即往下产生拖尾来自: Android客户端
发表于 2013-7-30 23:06:58 | 显示全部楼层
alina1123 发表于 2012-12-19 08:22
倪老师,请问这个绿光和红光之间是不是应该调节补偿呢?CCP处理后的全部是绿光(用来调节PE-FITC)?正常细 ...

根据我用小鼠精子做实验的情况来看,并不是说CCCP处理后全部是绿光,与处理前相比,而是非常非常淡的绿光,当然,处理后的红色也是非常非常淡的红色。正常细胞在激发光下应该是全部会发出红色光,但是如果你观察绿色荧光的话,绿色荧光同样会比较强。并不像某些文章中所说的那样----线粒体膜电位高,红光强,绿光弱;线粒体膜电位地,红光弱,绿光强。根据我的观察来看,反而是这样的---红光强的话,绿光也会强。
 楼主| 发表于 2013-7-30 23:16:56 | 显示全部楼层
a2782953 发表于 2013-7-30 23:06
根据我用小鼠精子做实验的情况来看,并不是说CCCP处理后全部是绿光,与处理前相比,而是非常非常淡的绿光 ...

感谢分享经验。可能在荧光显微镜下处理前后差别比较轻微吧。
在流式上应该是比较明显的。
发表于 2013-8-14 11:05:56 | 显示全部楼层
a2782953 发表于 2013-7-30 23:06
根据我用小鼠精子做实验的情况来看,并不是说CCCP处理后全部是绿光,与处理前相比,而是非常非常淡的绿光 ...

我也观察到和你看到的一样的情况,那个正常细胞红绿荧光都有啊 会不会是细胞状态或处理过程造成的啊
发表于 2014-2-19 10:23:31 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2012-12-19 09:10
一般可以适当调节,以便使正常细胞在fl1/fl2散点图上位于右上且呈椭圆形,发生线粒体膜电位降低的细胞,会 ...

老师,您好,我才开始做流式检测线粒体膜电位方面的实验,荧光探针也是JC-1,仪器的BD C6,样品是肿瘤细胞,但是做出来的结果发现FL1没有略微上升,反而是略微下降,在给药(包括阳性对照cccp)后30min发生转移,24h时和30min相比所有细胞团FL1都发生了略微下降,也就是在右上象限内细胞团都向左发生了略微偏移,这个和您说的以及我之前在网上调研的都不太相符,不知道是不是因为我的补偿没有调好或者没分析对的原因,FL2倒是有向下拖尾的现象,不是很明显,而且可能由于补偿原因感觉像是被削掉了一部分,用FL1补偿FL2之后可以调好,但是每个时间点或浓度点感觉补偿都有点不同。希望您能给我点建议,非常感谢!
发表于 2014-4-2 12:45:37 | 显示全部楼层
倪老师,我也用JC1测PBMC的MMP,横坐标FITC-H,纵坐标PE-H,PE调整了补偿,用CCCP处理后细胞基本都位于Q4,提示绿色荧光,未用CCCP处理的待观察细胞,根据CCCP射门,显示Q2为主(红色),其次是Q4,还有一些在Q3。请问根据您的经验,这种图是够合理?
 楼主| 发表于 2014-4-2 13:18:52 | 显示全部楼层
bingxuesong 发表于 2014-04-02 12:45:37
倪老师,我也用JC1测PBMC的MMP,横坐标FITC-H,纵坐标PE-H,PE调整了补偿,用CCCP处理后细胞基本都位于Q4,

能否把图传上来?来自: Android客户端
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