Annexin V-PI法检测凋亡的分析示例

niwanmao · 发表于 2010-8-1 18:53:43

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标题：Annexin V-PI法检测凋亡的分析示例

ANNEXIN V－PI法是检测细胞凋亡最常用的方法之一，步骤请参见http://www.flowcyto.cn/forum.php?mod=viewthread&tid=249。

在分析时，通常以ANNEXIN V为横坐标、PI为纵坐标。关于十字门的设置，从我个人经验来说，对于有明显分群现象的细胞，一般放置在细胞分群明显的位置，如下面4幅图所示；如果分群不明显的细胞，那么最好根据空白对照（即不加AV/PI）或不加药细胞设置十字门。

如果分析时发现结果与下面几个图有明显的不同，需要考虑以下几个方面：

您的细胞是否为贴壁细胞？贴壁细胞用AV-PI法检测会发现很多PI阳性细胞，这是因为消化细胞时常常会破坏细胞表面。可通过与不加药细胞进行比较设门。
细胞是否为GFP转染细胞？如是，需要改用Alexa Fluor® 647 Annexin V等非FITC和非PE标记。
细胞是否经过某些存在自发荧光的药物处理？如是，检测时需要注意排除其影响，如实在无法排除，建议采用其它方法检测。

12小时 24小时 36小时 48小时

shen_coco · 发表于 2011-12-4 21:10:10

倪老师那个详细步骤已经打不开了

niwanmao · 发表于 2011-12-5 08:27:56

shen_coco 发表于 2011-12-4 21:10

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倪老师那个详细步骤已经打不开了

感谢反馈。已纠正

shen_coco · 发表于 2011-12-5 12:10:24

niwanmao 发表于 2011-12-5 08:27

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感谢反馈。已纠正

已经看到了，谢谢倪老师

vetzcm · 发表于 2012-3-26 23:37:22

倪老师，您说的和不加药细胞比较设门具体是怎么个设门技巧呢？是不是做一空白不加药组细胞，进行AV-PI双染，然后再联合阳性组AV，PI单染进行画十字线的位置设门呢？贴壁细胞处理后Q2象限死细胞增多，此时是否可以将十字象限的定位往右上方平移，将空白未给药组背景值压低，此时再看给药组的凋亡率，这样做您觉得合理吗？谢谢

niwanmao · 发表于 2012-3-27 10:06:28

vetzcm 发表于 2012-3-26 23:37

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倪老师，您说的和不加药细胞比较设门具体是怎么个设门技巧呢？是不是做一空白不加药组细胞，进行AV-PI双染 ...

象空白对照，其实主要目的是用来粗调电压水平的。真正进行分析的时候，就是直接根据分群边界进行划分。

vetzcm · 发表于 2012-3-27 22:42:07

niwanmao 发表于 2012-3-27 10:06

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象空白对照，其实主要目的是用来粗调电压水平的。真正进行分析的时候，就是直接根据分群边界进行划分。
...

倪老师，上面给的四个图，是不是由12h的那个图画十字线，然后其余3个按固定的象限分析凋亡比例就可以了呢？这个细胞分群的把握有什么技巧吗？

niwanmao · 发表于 2012-3-27 22:50:33

vetzcm 发表于 2012-3-27 22:42

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倪老师，上面给的四个图，是不是由12h的那个图画十字线，然后其余3个按固定的象限分析凋亡比例就可以了呢 ...

一般情况下固定，但少数情况可能由于细胞内药物（例如柔红霉素等）影响，可能需要移动。

我在平时做的时候细胞分群都很清楚，如果点图看的不是很清，可以参考一下等高线图。

供参考。

vetzcm · 发表于 2012-3-27 22:52:42

niwanmao 发表于 2012-3-27 22:50

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一般情况下固定，但少数情况可能由于细胞内药物（例如柔红霉素等）影响，可能需要移动。

我在平时做的时 ...

谢谢老师的建议！

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