用Modfit分析细胞周期示例

niwanmao

标题：用Modfit分析细胞周期示例我们在用碘化丙碇染色法进行细胞周期检测时，首先要保存G1期细胞的FL2-A荧光强度位于200道左右，这样取下来的结果用Modift分析起来才准确。

如下图，在分析时，首先第一个门圈中非碎片区域；其次，第二个门在FL2-W/FL2-A图上按斜对角线区域画一类矩形区域，排除粘连体和非正常细胞；最后，在主分析图上，会出现一个双峰图，在Modfit自动分析窗口设置中，可勾选是否分析凋亡峰，并把G1、G2的峰中心位置调整到适当位置，单击自动分析按钮即可自动拟合曲线。
如果需要分析多倍体，建议勾选多倍体分析选项。
下图中diploid是二倍体的分析结果，dip g1是G1期比例，dip G2是G2期比例，Dip S是S期比例。％CV是变异度。

细胞周期modfit分析结果

shen_coco

好东西，谢谢啊

shen_coco

第一个门圈中非碎片区域的时候，X轴是用FSC-H还是FSC-A呢，我看我们院的流式老师用的是FSC-A，而你图上给出的是FSC-H,两者有啥差别呢

niwanmao

shen_coco 发表于 2011-11-30 00:14

                               
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第一个门圈中非碎片区域的时候，X轴是用FSC-H还是FSC-A呢，我看我们院的流式老师用的是FSC-A，而你图上给出 ...

X轴应该是FSC－height，至于FSC-H和FSC-A都只是显示的名称而已，不同机器显示上可能有差别，只要你分析的时候看参数是FSC物理参数就行了。

shen_coco

niwanmao 发表于 2011-11-30 12:55

                               
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X轴应该是FSC－height，至于FSC-H和FSC-A都只是显示的名称而已，不同机器显示上可能有差别，只要你分析的 ...

怎么看参数是物理参数啊，我用flowjo打开文件的时候发现无论选FSC-H还是FSC-A都可以看到散点图。。。

niwanmao

shen_coco 发表于 2011-11-30 20:00

                               
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怎么看参数是物理参数啊，我用flowjo打开文件的时候发现无论选FSC-H还是FSC-A都可以看到散点图。。。 ...

可能我表达有问题，我的意思是说FSC和SSC都是反映细胞物理特性的参数（如FSC反映细胞大小，SSC反映细胞内颗粒）。一般我们都选FSC-H（height）。虽然FSC-A能出来，但不建议用，因为反映的是AREA－面积。

shen_coco

niwanmao 发表于 2011-11-30 20:47

                               
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可能我表达有问题，我的意思是说FSC和SSC都是反映细胞物理特性的参数（如FSC反映细胞大小，SSC反映细胞内 ...

意思就是说X-轴选FSC-H，然后Y轴选SSC-H咯

niwanmao

shen_coco 发表于 2011-11-30 21:11

                               
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意思就是说X-轴选FSC-H，然后Y轴选SSC-H咯

是的。

shen_coco

niwanmao 发表于 2011-11-30 22:08

                               
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是的。另外，我不知道你用的是什么机器，如果是BD FACS CALIBUR，获取的时候控制面板上的DDM PARAMETER尽 ...

用的就是BD的机子，具体怎么操作的我也不知道，我只是把样本拿过去给流式的老师做，如果不选FSC那怎么观察细胞大小啊

haven_t

某些机器（特别是早期的机器）只有荧光通道有A这个参数，FSC与SSC只有H，所以按照国际惯例用H比较多。其实两者差别不大，你用FSC－H VS FSC－A作图看看，基本成一条线。分析时其实用其中一个就够了，把两者都储存在文件中只是浪费空间而已。