补偿调整还是死细胞多非特异性染色？

bimawenlaile · 发表于 2015-3-31 21:22:44

这是BD canto II 流式细胞仪的图形 gate1为小鼠脾脏淋巴细胞然后percp标记CD4 PE标记IL17 APC标记干扰素Y 但是图形这样到底是补偿的问题还是死细胞太多导致非特异性染色增多呢？

小憨 · 发表于 2015-3-31 21:46:32

我觉得像是死细胞的影响，可以尝试一下缩小并移动一下FSC/SSC中的门，看看会不会有改善。
另外补偿的调节可以用补偿微球做单阳，然后用软件自动补偿，就可以排除补偿调节中的人为失误。

bimawenlaile · 发表于 2015-3-31 22:41:44

在刺激内标的过程中，如何减少死细胞的影响呢，我这里是甲醛固定过夜，然后直接上机的

bimawenlaile · 发表于 2015-3-31 22:42:13

SSC/FSC门圈小了，似乎改变不大

小憨 · 发表于 2015-3-31 23:02:36

PMA和Ion刺激并不会死太多细胞，但是进行胞内流式染色时固定、破膜会造成很多细胞破碎，并且细胞团在FSC/SSC中向左下角移动，个人觉得胞内染色，破膜过程是关键。另外在做胞内染色过程中，细胞已经固定了，就不需要再把细胞悬在1%多聚甲醛/PBS中过夜了，直接放在PBS里就行，放越久碎片越多，但放一夜不会影响这么大。

niwanmao · 发表于 2015-4-1 09:11:21

bimawenlaile 发表于 2015-3-31 22:42
SSC/FSC门圈小了，似乎改变不大

一定要加live/dead染料啊，前段时间刚刚写过：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-4124-1-1.html

bimawenlaile · 发表于 2015-4-1 23:39:53

这是今天做的新鲜分离的小鼠外周血淋巴细胞直接标记CD4和CD62L 然后马上上机检测图形也是这样死细胞怎么解释呢？

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[细胞因子检测] 补偿调整还是死细胞多 非特异性染色？

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