火箭峰出现，见鬼了！！

culturelily

为何还是有火箭峰？
火箭峰部分是阳性细胞吗？

續、寫。

culturelily 发表于 2015-4-13 14:46
您好，我表示做了几次预实验，脾细胞几乎没有分三群的，一般只分一群，是个倒过来的“逗号”的样子。能否 ...

我的能够很好的分群，这样一般不会画到活性不好的细胞。

niwanmao

嗯，这是因为A门左上部分细胞是活力欠佳的细胞，所以会出现这个火箭峰，不过总体比例还算少的。

如果不想看到这种讨厌的火箭峰，可以考虑加入live/dead鉴别染料。

culturelily

niwanmao 发表于 2015-4-11 21:09
嗯，这是因为A门左上部分细胞是活力欠佳的细胞，所以会出现这个火箭峰，不过总体比例还算少的。

如果不想 ...

倪老师，第三张图就是去死细胞的门，已经排除掉了。难道是这个染料不好吗？

續、寫。

我建议SSC电压调高一点，我感觉你的物理参数图分不开，脾脏细胞一般是3群，碎片+活性不好细胞+活性好的细胞。你的A图画门有把活性不好的细胞画到里面，我感觉是这样，我做了很多脾脏细胞的流式。

niwanmao

culturelily 发表于 2015-4-11 22:46
倪老师，第三张图就是去死细胞的门，已经排除掉了。难道是这个染料不好吗？ ...

哦，昨天没注意到。
FITC/PE散点图出现火箭状的图形，多数还是跟状态不佳有关，可能live/dead染料能够排除大部分，而不能排除全部。但总体说来，你这个结果还是可以的。如果你要检测的双阳性细胞比例非常低，对这个0.85％非常在意，那么尝试着把前面几个门圈小一点试试。

culturelily

續、寫。 发表于 2015-4-12 13:42
我建议SSC电压调高一点，我感觉你的物理参数图分不开，脾脏细胞一般是3群，碎片+活性不好细胞+活性好的细胞 ...

您好，我表示做了几次预实验，脾细胞几乎没有分三群的，一般只分一群，是个倒过来的“逗号”的样子。能否把您的图发来看看。

culturelily

續、寫。 发表于 2015-4-13 17:26
我的能够很好的分群，这样一般不会画到活性不好的细胞。

谢谢分享。这个是我做的脾细胞，请看看有什么问题。

Arcrain

我觉得，FSC-SSC分群不清楚的样本，还是要加live/dead染色。
我也发现live/dead染色的确不能将全部的火箭峰都去干净，这部分火箭峰颗粒用annexin-v和7-aad等死细胞染料都染不上，比例也是接近1%作用，在FSC-SSC和A-H分群都很清楚的时候画门也不能完全去除。

Arcrain

突然想到一办法。跟大家分享一下。
要想全部去除，可不可以在上面讨论的方法清除之后，在用两个完全无关的通道做成二维图，看背景荧光，因为没有特异荧光溢漏，对角线分布的火箭峰就可以直接画门去掉，并且不会去掉有特异荧光的细胞。

我这样以前好像这么干过，不过没有用无关通道，而是直接在所测量的两个通道上把火箭峰画了个门。