Treg流式数据分析

ypzbest · 发表于 2015-4-21 23:05:02

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群里的老师好，附件中是我用磁珠分选的Treg细胞的流式数据，但不知道该如何分析？麻烦哪位老师能够帮我分析分析，尤其是如何利用阴性对照来设门？因为检测时间限制，标本染色后用1%甲醛固定过，4天后才上机检测的。阴性对照是分选后的细胞，未标记抗体；样本标记的是CD4-PerCP，CD25-APC，FoxP3-PE。万分感激！

Treg.zip (840.62 KB, 下载次数: 27)

niwanmao · 发表于 2015-4-22 20:24:22

看了下结果，发现你的foxP3分群不清，并且CD4和foxP3之间的补偿没法调。建议改用CD4 FITC。

ypzbest · 发表于 2015-4-22 22:59:03

非常感谢老师的回复。这次分选的纯度是不是很低？第一张图左边一大群是死细胞吗？是分选引起的还是用甲醛固定后导致的这样的结果？我很想知道在用流式软件分析时，如何利用阴性对照（未染色样本）来确定阴性和阳性细胞的界限？比如，如何确定foxp3阳性和阴性的界限？还有Foxp3染色时，加完Foxp3抗体后孵育了一夜，第二天洗涤后加液上机。孵育过夜有没有问题？会不会导致非特异性染色大大增加。非常感谢您能回到菜鸟的疑问。

niwanmao · 发表于 2015-4-23 09:14:43

ypzbest 发表于 2015-4-22 22:59
非常感谢老师的回复。这次分选的纯度是不是很低？第一张图左边一大群是死细胞吗？是分选引起的还是用甲醛固 ...

不应该用甲醛啊，而应该用foxP3破膜剂kit中的固定成份。你染色有没有进行破核膜处理？

ypzbest · 发表于 2015-4-23 15:23:07

破膜了，用了美天旎的Foxp3染色试剂盒，之后加甲醛固定是为了可以保存的时间更长，因为没法当时就检测

niwanmao · 发表于 2015-4-23 16:08:14

ypzbest 发表于 2015-4-23 15:23
破膜了，用了美天旎的Foxp3染色试剂盒，之后加甲醛固定是为了可以保存的时间更长，因为没法当时就检测 ...

你应该加入试剂盒中的固定成份固定过夜，第二天快轮到你上机了，再进行破膜和foxP3染色。

王娟 · 发表于 2015-4-30 09:43:33

倪老师，您好，我想问您，我也在做调节性T细胞检测，但是我之前抗体搭配错了，我买成了CD4-PE,CD25-PerCP-cy5.5。所以我想重新买个CD25的抗体，想问问您，在CD4-PE不变的条件下，我的CD25应该买什么染料搭配好呢？

niwanmao · 发表于 2015-4-30 10:50:49

王娟发表于 2015-4-30 09:43
倪老师，您好，我想问您，我也在做调节性T细胞检测，但是我之前抗体搭配错了，我买成了CD4-PE,CD25-PerCP-c ...

你的foxP3抗体是什么荧光？还有没有用其它抗体？

王娟 · 发表于 2015-4-30 21:46:49

niwanmao 发表于 2015-4-30 10:50
你的foxP3抗体是什么荧光？还有没有用其它抗体？

我暂时还没有买foxp3的抗体。如果我CD4用PE的话，是不是CD25和foxp3就不太好搭配了，倪老师？我CD4用PE的话，您能不能给我推荐一下cd25和foxp3的荧光染料搭配，因为买来的CD4不想浪费了。

niwanmao · 发表于 2015-4-30 22:13:30

王娟发表于 2015-4-30 21:46
我暂时还没有买foxp3的抗体。如果我CD4用PE的话，是不是CD25和foxp3就不太好搭配了，倪老师？我CD4用PE的 ...

还不知道你的仪器激光器配置，没法推荐。能否先告知激光器和滤光片的配置？

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[图片] Treg流式数据分析

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