细胞周期求助

雨后

做细胞周期有几次了，但结果不理想，出的图很丑，做流式的老师说我没固定好，但我确实是按照标准固定的，不知道哪里出了问题，请各位大神指点，谢谢啦！
固定方法：
1.用不含EDTA的胰酶消化，收集细胞800r,3min.
2.PBS洗1次，800r,3min
3.加500ul的10%FBS培养基重悬
4.加5ML 75%酒精固定（在震荡仪上，缓慢加入固定液），置于-20℃固定过夜
5.第二天，取出于预冷离心机中离心（2000r,5min）
6.用预冷的PBS洗2次（2000r,5min）7.加入周期试剂，重悬，室温避光30min，上机检测

niwanmao

细胞固定是没有问题，就是细胞粘连比较明显，你这是BD仪器吗？为什么不用FL2获取呢？可能FL2获取W和A参数会好看很多。

ssliang

老师，我也在做周期，想咨询一下细胞没固定好是怎么从图中看出来的。非常感谢

niwanmao

ssliang 发表于 2016-8-3 00:00
老师，我也在做周期，想咨询一下细胞没固定好是怎么从图中看出来的。非常感谢 ...

就看上面的那两幅图，一个是分群，一个是PI的染色强度分群。

雨后

niwanmao 发表于 2016-8-2 18:09
细胞固定是没有问题，就是细胞粘连比较明显，你这是BD仪器吗？为什么不用FL2获取呢？可能FL2获取W和A参数会 ...

好的，谢谢老师，我们科没有流式仪器，是自己固定好，别人帮忙上机，FL2什么也不了解，那为什么粘连这么多？有什么解决的办法吗？

niwanmao

雨后 发表于 2016-8-3 16:09
好的，谢谢老师，我们科没有流式仪器，是自己固定好，别人帮忙上机，FL2什么也不了解，那为什么粘连这么 ...

防止粘连的诀窍是：将新鲜标本充分混匀后，用吸管逐滴滴入振荡中的70％乙醇中，会效果好一点。

雨后

niwanmao 发表于 2016-8-3 18:06
防止粘连的诀窍是：将新鲜标本充分混匀后，用吸管逐滴滴入振荡中的70％乙醇中，会效果好一点。 ...

好的，明天试试，谢谢老师

didi_zhou

这是用的Guava么……？