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[凋亡检测] JC-1检测线粒体膜电位

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发表于 2016-8-28 10:36:45 | 显示全部楼层 |阅读模式
5流星
请问:1,用JC-1检测昆虫细胞线粒体膜电位时,不知道怎么圈门?看到有帖子说是用阴性对照和阳性对照设门,但我的细胞阴性和阳性的分界不明显。2,同时,设门之后,会出现有的FL-1通道荧光增强,有的FL-3通道荧光减弱(我用的是Beckman Moflo,红光在FL3通道检测),这样怎么计算红绿荧光的比值啊?图片格式是emf和bmp的,上传不了,哪位大神可以指点一下???



发表于 2016-8-28 21:29:33 | 显示全部楼层
EMF和BMP建议用看图软件转换为JPG格式上传。

具体的最好是直接圈出凋亡细胞,而不是计算比值,计算比值更多见于以前的免疫荧光时代,现在流式中虽然还是有人在用,但我个人觉得不太好,详细参见:http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5352-1-1.html
 楼主| 发表于 2016-8-30 20:38:57 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2016-8-28 21:29
EMF和BMP建议用看图软件转换为JPG格式上传。

具体的最好是直接圈出凋亡细胞,而不是计算比值,计算比值更 ...

非常感谢老师的指点,如果不计算比值,线粒体膜电位的下降就只能从图上大概的表示一下?还有,用画十字象限吗?我上传了几张做的流式图,感觉处理和对照差别不大,不知道是什么原因,希望老师能帮忙再指点一下。我从网上查到有人说在调好补偿的情况下,不用画十字象限,不能用两象限所占的百分比相来代表线粒体膜电位,应该分别找到红色和绿色荧光所对应的Geom值,再相除即可,您怎么看??问的问题比较多哈,希望老师可以原谅我这个刚入门的。

CPT处理

CPT处理

CPT处理

CPT处理

CK

CK

CK

CK

HCPT处理

HCPT处理
17.jpg
发表于 2016-8-31 08:01:50 | 显示全部楼层
shuang2014114 发表于 2016-8-30 20:38
非常感谢老师的指点,如果不计算比值,线粒体膜电位的下降就只能从图上大概的表示一下?还有,用画十字象 ...

你第一个CPT处理的那管,把十字门往上移到分界清晰处,其它两管十字门没有问题。
直接读取右下象限的数值,就是线粒体膜电位发生降低的早早期凋亡细胞比例。

我前面说了,用红、绿荧光相除,那是以前的老方法,尽管还有少量文章在用,但不太合理。
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