zhu 发表于 2017-7-6 22:57
那倪老师，比如说上图这个，一抗使用5u是如何确定的呢？

这一般根据厂家推荐，先定一个固定的一抗用量，然后滴定二抗。

好的，多谢倪老师！！！

倪老师，请教一下：由于一抗厂家未给确切的用量，我又想节省抗体。图一用了2.5ul一抗，图二用了5ul一抗，还没滴定二抗的情况下，两个我都用了足量的10ul二抗，是FITC标记的。想问下：1、我这个一抗用2.5ul够么？还有可能再减点儿么？2、二抗是不是太多了？3、这个做的怎么样呢？@niwanmao 老师~

zhu 发表于 2017-7-13 23:18
倪老师，请教一下：由于一抗厂家未给确切的用量，我又想节省抗体。图一用了2.5ul一抗，图二用了5ul一抗，还 ...

不知道你用的是什么单抗，感觉阳性峰分得不好啊。这样无法计算染色指数。
不过从肉眼看，两个浓度相差不大。
可以再减减看，然后确定好最佳一抗浓度之后，再进行二抗浓度滴定。

好的，谢谢倪老师指教！我用的是abcam家的表面抗原的单抗。看了您之前的帖子就没有用血清封闭。但是这个表面抗原在淋巴细胞和单核细胞上都有表达。阳性峰不好跟这个有关系么？会跟二抗过量有关系么？还是其他的原因呢？倪老师辛苦了~