IL17流式检测

mamba

请教各位老师，我做的IL17为什么总是出现这些问题，同型高于实验组。[img=0,1]file:///C:\Users\mamba\AppData\Roaming\Tencent\Users\473815258\QQ\WinTemp\RichOle\QD~3YFZ%23[Z7~5M}U[J)KO.png[/img]

mamba

补足下IL17为APC标记，纵坐标为APC-IL17，横坐标为PE-FOXP3；用的是PMA与ion刺激5小时，goldistop阻断。问题一：我同型总是跑这么高，就不知道怎么圈IL17了；问题二：在图2中，我也是硬着头皮这样圈门的，不知道对不对？另外我感觉我细胞刺激得还不够，是不是有这种可能才出现图2的情况，请各位老师分析分析

niwanmao

mamba 发表于 2017-1-20 21:41
补足下IL17为APC标记，纵坐标为APC-IL17，横坐标为PE-FOXP3；用的是PMA与ion刺激5小时，goldistop阻断。问 ...

你的同型对照是不是没有进行破膜？

mamba

niwanmao 发表于 2017-1-20 22:29
你的同型对照是不是没有进行破膜？

ebi的破膜剂，每次都是这样，同型冲得很高。破膜了

mamba

另外，我们实验室做同型对照，很多时候都会出现这种情况，用0.1%叠氮钠、4%FBS、96%的PBS混合物洗涤也试过，就差FC受体阻滞剂没用了

mamba

这是PE单标管，我以这种圈得APC-IL17

niwanmao

mamba 发表于 2017-1-20 23:44
这是PE单标管，我以这种圈得APC-IL17

应该是同型对照的选择不正确。建议不用同型对照，用FMO对照。

mamba

niwanmao 发表于 2017-1-20 23:53
应该是同型对照的选择不正确。建议不用同型对照，用FMO对照。

倪老师，同型应该不会选错吧，同一家公司ebi，加得剂量也是一样，我都反复确认核对过。如果用FMO，就是我这张图的圈门方法呗？你看行么？

mamba

另外，我在补充下，因为我是分选过的CD4+ T CELL，纯度98%以上，我就没有标记CD4之类的，就当作全是CD4 T cell。就两标APC、PE

niwanmao

mamba 发表于 2017-1-21 00:03
倪老师，同型应该不会选错吧，同一家公司ebi，加得剂量也是一样，我都反复确认核对过。如果用FMO，就是我 ...

同型对照的选择十分难选，要求亚型、浓度、荧光素都完全一致，并不是说同一家公司就肯定就可以。所以目前对同型对照的意义越来越不重视。

由于IL17的分群还是不错的，可以不用同型。你所说的两标都分别是什么抗体？