来围观一下如何从牙齿里分离出干细胞并用流式鉴定

这是Paolo Di Nardo et al. (eds.), Adult Stem Cells: Methods and Protocols, Methods in Molecular Biology上的一个章节，由于不是自己的专业，所以感觉比较新奇，与大家分享一下。

该章节描述了一种简化的方法，可系统地分离多种类型的牙干细胞，如牙髓干细胞（DPSC）、牙周韧带干细胞（PDLSC）和根尖乳头干细胞（SCAP）。特别有意思的是通过连续冲洗、减少来自牙周旋转的摩擦热以及减少牙本质与牙本质的接触时间，可以使DPSC受到的创伤最小化。此外，凿子和槌的使用将使培养的活DPSC的数量最大化。分离出各类细胞后，还用流式细胞术证实了DPSC、PDLSC、SCAP三类干细胞的MSC特征性标记，并可体外诱导培养成为骨细胞，脂肪细胞或软骨细胞，用于细胞治疗和组织工程中的后续实验。总的来说，这种方法适用于具有细胞培养条件的任何实验室。

下面看一张示意图，展示了牙齿干细胞分离和鉴定的简易步骤

a、b 从健康人拔取牙齿，转移到有保存液的容器中。
c、在实验室中，分离出牙髓干细胞（DPSC）、牙周韧带干细胞（PDLSC）和根尖乳头干细胞（SCAP）。
d、通过酶解组织，获得单个细胞悬液，然后通过70um细胞滤器过滤，去除大的细胞团块和组织碎片。
e、f 培养牙齿干细胞
g 鉴定牙齿干细胞的MSC特征，主要是：(1)塑料粘附；(2)流式细胞术分析，表达CD73、CD90、CD105，不表达CD45、CD34、CD19、CD79a、CD14、CD11b、HLA-DR。(3)体外特殊培养条件下可诱导成为脂肪细胞、软骨细胞、骨细胞等。

下面再看一幅真正的分离牙齿干细胞实战图解：

a、分离牙齿干细胞的工具。
b、在置于冰上的培养皿中，用手术刀片＃11从牙齿上切除牙龈组织。
c、使用外科刀片＃11从根的中间三分之一到根尖轻轻地刮擦牙周组织。
d、用止血钳夹住牙齿，在用无菌PBS灌注的同时，用直线硬质合金刀在牙釉质骨质分界处（CEJ）划出一个水平凹槽。
e、这就是划出的水平槽，深度达到牙髓腔（白色箭头显示了牙髓腔和牙髓组织暴露）。
f、使用凿子和槌子分裂牙齿。
g、用小镊子取出牙髓组织。
h、用中性蛋白酶II、1型胶原酶和含1％抗生素/抗真菌药的PBS消化牙髓组织。
i、在37℃下孵育1小时后消化的牙髓组织。
j、将含有DPSC的溶液通过70μm细胞过滤器过滤，以除去大的组织残余物或细胞团

最后，鉴定的时候，流式细胞术上场了：

a-e显示了设门步骤，f－h显示的是最后圈中的MSC群体的表达情况，非常典型的CD73＋、CD90＋、CD105＋。


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