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ps654321 发表于 2017-5-22 21:28 有个请教,单一细胞株,比如要验证CD20+,利用Fc, 设组: 1、空白细胞+Fc阻断剂(这里阻断剂能否去掉?) 阻断剂不能去掉。 为何不可以去掉呢? 空白细胞上又没染染料,上流式也不会发光,加阻断剂也不是为了阻止自发荧光? 为何还要多加阻断剂呢? |
本帖最后由 ps654321 于 2017-5-22 21:32 编辑 有个请教,单一细胞株,比如要验证CD20+,利用Fc, 设组: 1、空白细胞+Fc阻断剂(这里阻断剂能否去掉?) 2、CD20 PE+Fc阻断剂 是否这是正确使用Fc阻断剂的方式?因为看了 就是说,你在单标时,使用空白细胞+阻断剂,即可代替以前苦苦追寻的同型对照 有点疑惑 |
ps654321 发表于 2017-5-22 21:28 阻断剂不能去掉。 |
弱弱的问一下,一般不是可以利用同型对照来设门吗,为什么“图2”中加了同型对照后,设门位置就不对了呢?却还是以空白对照的位置来设门,而不能以同型对照来设门呢?谢谢! |
除了商品化的阻断剂,我看血清也可以,那么做猴子的细胞最好用猴的血清做阻断剂吧? |
还有,商品化的Fc阻断剂贵吗,还没用过 |
家的感觉 发表于 2017-5-23 08:39 请仔细看帖,同型对照是祖传的观念,并且可以说90%以上的同型对照都是没选对的,因为谁都没有验证过非特异结合能力、荧光:抗体比等等是否一致,只是厂家说是就是。实际上Fc阻断就已经代替掉了同型对照的作用。 |
mingxu95 发表于 2017-5-23 09:01 商品化的Fc Blocking solution是偏贵的,可以考虑AB型血清。如果是猴子,我记得猴子应该也 是有血型的,可能也需要注意血型,否则细胞要被血清中的血型抗体破坏。 |
学习了,一直在对做不做同型对照矛盾着,丹麦的科研人员是有心人,楼主也是有心人 |
同型对照可以消除自发荧光,FC受体介导的抗体结合,非特异性抗体结合。。。而Fc阻断只是消除了FC受体介导的抗体结合 |
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