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[干细胞相关] CD105阳性表达结果

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发表于 2017-6-20 11:32:22 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
本帖最后由 大礼 于 2017-6-20 11:41 编辑

各位前辈好,我是做干细胞的,用BDC6跑了一下流式,单独跑的间充质干细胞表型CD105,跑了4管,空白;同型;样本和同型跟样本混合后跑的结果,一般间充质干细胞表型CD105阳性结果是95%以上,为何我跑的结果不在正常范围内,因为是单独跑的CD105所以就不存在补偿问题,同样的样本别人跑的结果正常。附件1是我调整的结果图。剩下的几个是跑过流式原始图FCS文件格式,可以放在您们流式仪上帮忙分析一下,有以下几个疑问

  • 该样本的散点图中如何确定要研究的细胞也就是间充质干细胞。因为有两群细胞
  • 如果按照同型对照图马克线在2%以内的话,结果就偏低于95%,但如果混合后细胞按照阴性和阳性各50%左右计算结果就正常大于95%,那我是按照哪一个标准来得出最终的结果,我跑的空白和同型为何百分比变化那么大?
  • 还有就是同型对照的马克线要求在百分之多少以后得出的结果图算是准确的,2%以内正确吗?


麻烦传授一下经验,谢谢。

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发表于 2017-6-20 15:01:59 | 显示全部楼层
从附件的图片看,你这些细胞90%以上都是凋亡细胞或碎片,所以会对结果影响很大,会产生很明星的非特异性染色,所以使得你的结果出现很多超出常理的问题。
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 楼主| 发表于 2017-6-20 15:49:47 | 显示全部楼层
那倪老师怎么从图中判断90%以上的是细胞碎片和凋亡呢,在FSC/SSC中具体位置在哪里,怎么判断的,是反向设门吗?倪老师麻烦您教教如何反过来推论是细胞凋亡和死亡碎片,多谢多谢。
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发表于 2017-6-20 18:07:00 | 显示全部楼层
大礼 发表于 2017-6-20 15:49
那倪老师怎么从图中判断90%以上的是细胞碎片和凋亡呢,在FSC/SSC中具体位置在哪里,怎么判断的,是反向设门 ...

就是你圈中的这类勉强算活细胞,剩余的信号里面FSC小而SSC偏大的就是凋亡细胞,而FSC小、SSC小的就是碎片。
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 楼主| 发表于 2017-6-21 10:25:53 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2017-6-20 18:07
就是你圈中的这类勉强算活细胞,剩余的信号里面FSC小而SSC偏大的就是凋亡细胞,而FSC小、SSC小的就是碎片 ...

谢谢倪老师,不过那个流星怎么给您啊,还有老师我是不怎么会反向设门,老师有空的话就用我发的图,您在图中教教我怎么反过来确认死细胞和凋亡细胞的大概位置,可以在图里做,我学习一下。感激不尽,麻烦了谢谢。
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发表于 2017-6-21 19:42:10 | 显示全部楼层
大礼 发表于 2017-6-21 10:25
谢谢倪老师,不过那个流星怎么给您啊,还有老师我是不怎么会反向设门,老师有空的话就用我发的图,您在图 ...

流星不要紧。
你这几个图不需要通过反向设门就看的出来明显的凋亡和碎片。
反向设门就是你首先圈出某个CD分子阳性的细胞群,然后反过去看这些细胞在FSC/SSC散点图上的分布。
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 楼主| 发表于 2017-6-22 11:05:24 | 显示全部楼层
好的,谢谢老师的耐心解答,非常感谢
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