相同电压下，为什么跑出来的物理图差别很大

飞鸿317

最近在学习用fortessa跑流式，样本分成两次来做，用的是相同的电压。但跑出来的FCS和SSC的值差别特别大？
如图
为什么啊？这两次的结果还能一起分析吗？
顺便补充一下，圈出T细胞门后，CD3+CD4+（请忽略没有调好的补偿）的细胞荧光强度是如图的样子。

niwanmao

像是仪器不稳定的感觉。

我想成大牛

首先，你看看两次的FSC/SSC的坐标大小，很明显的不一样。第二幅图点Y轴上“T”按钮，调小SSC。后面CD3/CD4的图需要做transforms，展开图片，这样就不会出现现在的情况了，这个是flow jo软件的问题，不是流式仪的问题。最后，很重要的，你要检查fortessa是否很脏，你的上样浓度是否合适，是否过滤，如果前一个样浓度高或者有很多残留细胞在机器里面，foretessa的SSC和FSC即便数值没变，跑出的图形也会变形，需要做清洗后才能恢复正常的图形。

浪漫纷飞

第二幅图是后面做的吧。