同一批样本的T细胞B细胞有些分群有些不分群，染色失败？

hdwd22

倪老师，您好，我今天做flow发现一个非常奇怪的问题，同一批做的脑组织的样本，同样染CD3 FITC； CD19 BUV395； CD4 APC 和 CD8 BUV510 以及其他5种表面marker， 但是8个样本中只有其中的一个可以见到明显的T细胞和B细胞的分群，其他的7个只能分出CD3阴性和阳性两群，而在CD3 阳性的T 细胞里，这7个样本也不能在CD4和CD8的两个marker 中分群。（ 附图 分别为 可以分群的脑1（T&Bcell），脑1（CD4，CD8 Tcell）， 不能分群的脑2（ B& Tcell），第二排是脑2（CD4&CD8） ，以及两个血样品的分群。 这8个样本都是我亲自同时处理的，使用的是同时配好的同一管抗体，设门前排除了死细胞（只用了FSC－w和SSC－w）和粘连体，补偿调节似乎也没太大问题，同时为了证实抗体是好用的，我还同时染了血和脾，都可以清晰的分群。 我之前从没有遇到过这么奇怪的现象，请问为什么同一批染色会出现这么大差异？非常感谢！

脑1

脑1

脑2

脑2

血

血

niwanmao

有些酶会对抗原有影响的，你用什么办法解离组织的？

hdwd22

niwanmao 发表于 2017-11-20 20:02
有些酶会对抗原有影响的，你用什么办法解离组织的？

我用的是现成的Miltenyi 家专门制备脑组织单个细胞的kit，用的30%和70% percoll 密度梯度离心分离的细胞。

niwanmao

hdwd22 发表于 2017-11-21 00:09
我用的是现成的Miltenyi 家专门制备脑组织单个细胞的kit，用的30%和70% percoll 密度梯度离心分离的细胞 ...

有没有用过酶？我记得这个Kit应该是含酶的。如果有的话，你改成不用酶，单纯用机械法试试，尽管死细胞可能会增多，但染色可能会改善。

hdwd22

niwanmao 发表于 2017-11-22 08:31
有没有用过酶？我记得这个Kit应该是含酶的。如果有的话，你改成不用酶，单纯用机械法试试，尽管死细胞可 ...

好的，谢谢倪老师！