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用流式细胞术测量主动脉细胞液相胞饮作用

发布者: niwanmao | 发布时间: 2018-3-22 16:51| 查看数: 395| 评论数: 0|帖子模式

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液相吞饮是所有哺乳动物细胞非受体依赖的内吞作用,可能是巨噬细胞摄取低密度脂蛋白的机制。但目前还没有测量体内单个主动脉细胞的液相胞饮作用的方法。
Anzinger Joshua J等人向ApoE-/ -小鼠眼球后注射不会与细胞相互作用的AngioSPARK荧光纳米微球(0.125 nmol AngioSPARK/kg)。24小时后,处死小鼠,在显微镜下小心分离主动脉,放在20mM HEPES的PBS中于37℃孵育1小时(内含125U/mL胶原酶XI、450U/mL胶原酶I、60U/mL DNA酶I、60U / mL透明质酸酶、100U / mL弹性蛋白酶和1mg/mL大豆胰蛋白酶抑制剂)。在此期间,每个样品用1mL移液管吹打4次。 然后将消化的主动脉通过30μm(孔径)的过滤器研碎并在1.5 mL微量离心管中以200g离心10分钟。 去除上清液,并在冰上用1μL Fc阻断剂和89μL含有0.1%BSA、2m M EDTA的PBS重悬细胞团块10分钟,接着分别与CD11b抗体或同型对照孵育,4度30分钟,最后通过流式细胞术检测主动脉细胞摄取AngioSPARK的量。

结果发现,与未表达CD11b的主动脉细胞(MFI为408.3)相比,注射AngioSPARK的小鼠表达CD11b的主动脉巨噬细胞表现出高水平的液相胞饮作用(MFI为4393.7)。
图片 1.png

这篇文章的意义何在呢?主要是找到了一种可用于测量细胞在体内液相吞饮的新方法,既可检测主动脉巨噬细胞,也可检测其他组织细胞。由于液相胞饮作用是LDL摄取、致病微生物进入和癌细胞摄取营养物质的重要机制,所以如果通过靶向药物限制液相胞饮作用,或许能起到较理想的治疗作用。

文献源:Anzinger JJ, Jin X, Palmer CS, Dagur P, Barthwal MK, Kruth HS. Measurement of Aortic Cell Fluid-Phase Pinocytosis in vivo by Flow Cytometry. J Vasc Res. 2017;54(4):195-199. doi: 10.1159/000475934.

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